Deze mededeling bevat gegevens over de nauwkeurigheid en de reproduceerbaarheid van de BioSpec-nano UV-VIS spectrofotometer voor dsDNA en eiwit kwantificatie. Zelfs met ultra-kleine volumes (1 tot 2 L), reproduceerbaarheid is uitstekend, terwijl de automatische vegen functie verbetert de doorvoer en resulteert in een minimale overdracht voor betere resultaten.
Nucleic Acid kwantificatie procedures aanzienlijk gevorderd in de laatste drie decennia. Meer en meer, moleculair biologen nodig consistente klein-volume analyse van nucleïnezuur monsters voor hun experimenten. De BioSpec-nano biedt een mogelijke oplossing voor de problemen van onjuiste, niet-reproduceerbare resultaten, die inherent zijn aan de huidige DNA kwantificering methoden, via gespecialiseerde optica en een gevoelige PDA detector. De BioSpec-nano heeft ook geautomatiseerde functionaliteit zodanig dat montage-, meet-, en het schoonmaken worden gedaan door het instrument, zodat er geen vervelende, repetitieve, en inconsistente plaatsing van de glasvezel-element en handmatige reiniging.
In deze studie worden gegevens gepresenteerd over de kwantificering van DNA en eiwitten, evenals op metingen reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid. Geautomatiseerde monstervoorbereiding contact en een snelle scan kunnen de metingen in drie seconden, wat resulteert in uitstekende doorvoersnelheid. Data-analyse is uitgevoerd met behulp van de ingebouwde functies van de software. De formule voor het berekenen van DNA-concentratie is:
Voorbeeld Concentratie = DF · (OD260-OD320) · federatie (1)
Waar DF = verdunningsfactor monster en de federatie = nucleïnezuur concentratie factor.
Het nucleïnezuur concentratie factor is ingesteld in overeenstemming met de analyt geselecteerde 1.
Eiwitconcentratie resultaten kunnen worden uitgedrukt in microgram / ml of in mol / L door het invoeren van e280 en waarden voor het molecuulgewicht respectievelijk. Bij het residu waarden voor Tyr, Trp en Cysteïne (SS obligatie) worden ingevoerd in de e280Calc tabblad, worden de extinctiecoëfficiënt waarden berekend als e280 = 5500 x (Trp residuen) + 1490 x (Tyr residuen) + 125 x (cysteïne SS bond) . De e280 waarde wordt gebruikt door de software voor de concentratie berekening.
Naast de concentratie bepaling van nucleïnezuren en eiwitten, kan de BioSpec-nano gebruikt worden als een ultra micro-volume spectrofotometer voor veel andere analyten of als een standaard spectrofotometer met behulp van 5 mm weglengte cellen.
De BioSpec-nano is ontworpen om de huidige problemen die inherent zijn aan DNA kwantificering methoden, zoals inconsistente resultaten en vervelend handenarbeid op te lossen. Elke meting duurt slechts drie seconden, zodat een ervaren moleculair bioloog aan ongeveer 3-6 meerdere monsters te analyseren in een minuut. Het unieke ruitenwisser-functie verbetert niet alleen de doorvoersnelheid van de meting, maar elimineert ook de noodzaak voor het handmatig reinigen van de voetstukken, wat resulteert in verwaarloosbare overdracht tussen de metingen. Bovendien, tests met slechts twee doekjes voor DNA-monsters die 1000 ng / ul, aangegeven overdracht minder dan 2 ng / ul.
De beschikbaarheid van een 5 mm weglengte cel biedt een mogelijkheid om te verdunnen nucleïnezuur en eiwit te analyseren en breidt het gebruik van dit instrument voor andere toepassingen.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BioSpec-nano | Shimadzu | |||
Calf Thymus DNA | Sigma Aldrich | |||
Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich |