Vibratome切片增强保尔蒂哺乳动物器官的细胞构筑
Summary
一个简单的程序，切片，免疫组织化学和激光共聚焦显微镜Corti器的vibratome描述。此过程允许的罚款尔蒂哺乳动物器官的细胞结构的改善保存，因此可以准确定量的细胞类型。
Abstract
尔蒂哺乳动物器官是一个高度有序的mechanosensory头发和nonsensory支持细胞的细胞镶嵌
（在1,2审查）。可视化的这种细胞的马赛克往往需要Corti器的横截面。特别是nonsensory支柱和Deiters细胞，其细胞核位于毛细胞基部，不能无交叉切片Corti器的可视化。然而，细腻尔蒂哺乳动物器官的细胞结构，包括罚款的支柱和Deiters细胞的胞质突起，是难以保持常规病理过程，如石蜡及冷冻切片，这是与标准的免疫组织化学染色技术兼容。
在这里，我描述了一个简单而强大的程序，包括耳蜗，在整个装载这些vibratome部分的免疫组织化学染色，共聚焦显微镜，切片vibratome。这个程序已经广泛用于多个器官，包括鼠标肢芽，斑马鱼肠道，肝，胰，心（见3-6选定的例子）的immunhistochemical分析。此外，此过程成像和quantitificaton支柱细胞在胚胎和成年小鼠7尔蒂突变和控制机关数sucessful。然而，这种方法是目前没有被广泛用来研究哺乳动物器官的尔蒂。在此过程中的潜在的罚款尔蒂成人器官的细胞结构都提供了增强的保存和允许各种细胞类型的量化描述。
Protocol
Discussion
vibratome切片，免疫组织化学和激光共聚焦成像的过程，允许尔蒂与器官组织的损伤最小的可视化。显然，从内部在vibratome部分地区采取的共聚焦图像显示对细胞的形态，只有通过固定工件有限的优秀保存。接近两个削减了vibratome部分表面的共聚焦图像往往无法区分来自内部区域的图像，虽然偶尔蜂窝中断，如在休息的支柱细胞的细胞质扩展，观察（未显示）。这种方法很简单，主要设备的物品 – …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
笔者想承认儿童研究所成像核心使用共聚焦显微镜和张健博士的建议，安装使用琼脂糖珠的部分。这项工作是由美国国立卫生研究院授予DC010387。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Leica VT1000S Vibrating Blade Microtome | Leica | ||
| Zeiss LSM510 laser scanning confocal microscope | Zeiss | ||
| Student Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| UltraPure Low Melting Point Agarose | Invitrogen | 16520-050 | |
| Peel-A-Way embedding mold | Polysciences | 18986 or 18646A | |
| bovine serum albumin | Jackson ImmunoResearch | 001-000-162 | |
| Goat Serum | Invitrogen | 16210-064 | |
| S100 | Dako | Z0311 | |
| Alexa Fluor 568 goat anti-rabbit IgG | Invitrogen | A-11036 | 1:1000 dilution |
| Vectashield | Vector Labs | H-1000 | |
| YO-PRO-1 | Invitrogen | Y3603 | |
| vacuum grease | Fisher | S41718 | |
| Affi-Gel Blue Gel | Bio-Rad | 153-7301 |
References
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