Summary

Tek Drosophila Ommatidium Diseksiyon ve Görüntüleme

Published: August 19, 2011
doi:

Summary

Yetişkin kullanımı sınırlayıcı faktör<em> Drosophila</em> Göz nörodejenerasyon ve hücre biyolojisi çalışmada, hücre içi süreçlerin zor görüntüleme. Biz, ilaç tedavisi ve ileri görüntüleme konusu olabilir iyi niyetli bir primer nöronal hücre kültürü, oluşturmak için tek ommatidia diseksiyonu açıklar.

Abstract

Meyve sineği Drosophila melanogaster sinirbilim araştırması için çok değerli katkılarda bulunmuştur ve nörodejeneratif hastalıklar için çünkü güçlü genetik 1 bir model olarak yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır. Özellikle sinek göz Drosophila sinir sisteminin en erişilebilir ve yaşam vazgeçilebilir bir parçası olmak, nörodejenerasyon araştırma için tercih organı olmuştur . Ancak sağlam gözleri en önemli uyarı nörodejenerasyon anlamak için her şeyden otofaji dinamikleri 2 hücre içi olaylar gibi görüntüleme, çünkü pigment yoğun otofloresans zorluk.

Biz son zamanlarda Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofi bir sinek modeli (DRPLA) 3, 4 otofajik işlev bozukluklarının anlaşılması için gerekli olan tek ommatidia 3 diseksiyon ve kültür kullandık .

Şimdi nörodejenerasyon için sinek modelleri olasılığını önemli ölçüde genişletmek için muhtemel elektrofizyolojik çalışmalar 5, uyarlanmış bu tekniği (Şekil 1), kapsamlı bir açıklama raporu . Bu yöntem, görüntü, canlı hücre içi olaylar ve fotoreseptör hücrelerinin (Şekil 2) üzerine etkili ilaç yönetimini izlemek için adapte edilebilir. , Mozaik teknikleri 6-8 ile birlikte kullanılması durumunda, hücrelerin genetik olarak farklı tepkiler (Şekil 2) paralel olarak test edilebilir .

Protocol

1. Drosophila retina diseksiyonu Bir iyi bir 3-Well Cam Slayt doldurun fosfat tamponlu salin (PBS 1X) ve sonra CO 2 sinekler uyutmak. Hem erkekler hem de bu deney için kullanılabilir. Sinekler anestezi sonra, forseps kullanarak tek bir sinek pick up ve PBS küçük bir çanak içine bırakın. Diseksiyon kapsamında, forseps ile burnumun çimdik, ve daha sonra ikinci bir forseps kullanarak boyun kesilmesinin vücut baş ayırmak. Sol / sağ orta hat beyin or…

Discussion

Burada sunulan tek ommatidium diseksiyonu Drosophila göz modellenen nörodejenerasyon gibi süreçleri hakkında derin hücre biyolojik bilgi toplama sağlar. Fotoreseptör nöronlar diğer nöronlarla daha kolay erişilebilir ve onlar sitoplazma, in vivo olarak nörodejenerasyon ölçmek için birçok model yetkin kullanılan çok aynı hücrelerde, özellikle büyük ve böylece vezikül dinamiklerini incelemek için uygun . Diseksiyon kritik yönü ağırlıklı olarak Sabitlenmemiş doku kadar kur…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biz Bernard Charroux tartışmalar için teşekkür ederiz. Bu çalışma KCL Biyomedikal Okulu tarafından finanse edildi.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser Flystuff 59-150 Refills also available
DUMONT Tweezer No 5 AGAR Scientific T5034  
3-Well Glass Slide EMS 71561-01  
Micro scissors VWR HAMMHSB516-09  
Schneider’s Medium VWR 733-1663  
LysoTracker Red DND-99 Invitrogen L7528  
Superfrost Slides VWR 631-0108  
Vectashield with Dapi Vector Labs H-1200  
Coverslips VWR 631-1336  

References

  1. Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
  2. Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
  3. Nisoli, I. Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy. Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).
  4. Charroux, B., Fanto, M. The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration. Autophagy. 6, 667-669 (2010).
  5. Hardie, R. C. Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors. J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).
  6. Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).
  7. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
  8. Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila. Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).
  9. Napoletano, F. Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat. The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).
  10. Ravikumar, B. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nature. 36, 585-595 (2004).
  11. Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).

Play Video

Cite This Article
Volpi, V., Mackay, D., Fanto, M. Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging. J. Vis. Exp. (54), e2882, doi:10.3791/2882 (2011).

View Video