The Lookout Mycoplasma PCR Detection Kit maakt gebruik van de polymerase chain reaction (PCR), die gevestigd is als de methode van keuze voor de hoogste gevoeligheid in de detectie van Mycoplasma, Acholeplasma, en Ureaplasma besmetting in celkweken en andere celculturen afgeleid biologicals.
Het onderhoud van de verontreiniging-vrije cellijnen is essentieel voor cel-onderzoek. Een van de grootste verontreiniging zorgen zijn mycoplasma besmetting. Hoewel mycoplasma meestal niet doden verontreinigd cellen, zijn ze moeilijk te detecteren en kan een verscheidenheid aan effecten op de gekweekte cellen, met inbegrip veranderde metabolisme veroorzaken, vertraagde proliferatie en chromosomale afwijkingen. In het kort, mycoplasma besmetting compromissen van de waarde van deze cellijnen in het verstrekken van accurate gegevens voor de life science onderzoek.
De bronnen van mycoplasma besmetting in het laboratorium zijn zeer uitdagend om volledige controle over. Aangezien bepaalde mycoplasma soorten zijn te vinden op de menselijke huid, kunnen ze worden ingevoerd door middel van een slechte aseptische techniek. Bovendien kunnen ze komen van verontreinigde supplementen zoals foetaal runderserum, en vooral van de andere besmette celculturen. Zodra mycoplasma een cultuur vervuilt, kan het zich snel verspreiden naar andere delen van het lab besmetten. Strikte naleving van goede laboratoriumpraktijken zoals een goed aseptische techniek zijn de belangrijkste, en routine testen op mycoplasma is zeer aan te bevelen voor een succesvolle controle van mycoplasma besmetting.
PCR-gebaseerde detectie van mycoplasma is uitgegroeid tot een zeer populaire methode voor routine-cellijn onderhoud. PCR-gebaseerde detectie methoden zijn zeer gevoelig en kunnen snel resultaten, die stelt onderzoekers in staat om snel te reageren te isoleren en te elimineren besmetting als het eenmaal is gedetecteerd in vergelijking met de tijd die nodig is met behulp van microbiologische technieken. The Lookout Mycoplasma PCR Detection Kit is zeer gevoelig, met een detectielimiet van slechts 2 genomen per il. Gebruik te maken van de zeer specifieke JumpStart Taq DNA-polymerase en een eigen primer design, zijn valse positieven sterk verminderd. De handige 8-buis-formaat, strips pre-gecoat met dNTP's, en de bijbehorende primers helpt bij het verhogen van de doorvoer naar de behoeften van klanten te voldoen met grotere collecties van cellijnen.
Gezien de extreme gevoeligheid van de kit, moet grote zorg worden genomen om onbedoelde verontreiniging van monsters en reagentia te voorkomen. De stap-voor-stap protocol tonen we belicht de voorzorgsmaatregelen en de praktijken die nodig zijn voor een betrouwbare mycoplasma detectie. We laten ook zien en bespreken typische resultaten en hun interpretatie. Ons doel is ervoor te zorgen voor het succes van de onderzoekers het gebruik van de LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit.
Vanwege de extreme gevoeligheid van de kit, indien correct uitgevoerd van de kit moet opleveren precieze resultaten waaruit blijkt of je steekproef mycoplasma besmetting heeft. De kit is geoptimaliseerd voor gebruik met JumpStart Taq DNA-polymerase. Andere taqs kunnen worden gebruikt bij de voorbereiding van de monsters, maar de interne controle band op 481 bp moet aanwezig zijn om de juiste gevoeligheid van de alternatieve Taq te geven. Het is mogelijk voor de positieve bands te exposeren verschillende dichtheden, afhankelijk van de mate van verontreiniging. Het is mogelijk om de afwezigheid van de interne controle band op zwaar verontreinigde monsters. Met behulp van voorzichtigheid en een goede techniek bij het bereiden van de monsters om besmetting te voorkomen zijn essentieel voor een goede. detectie bij gebruik van de LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit.
The authors have nothing to disclose.
Gefinancierd door Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |