Oeufs Poulet fenêtrage d'études du développement
Summary
La facilité d'accès de l'embryon a permis de cartographier les expériences destinées cellulaires en utilisant plusieurs méthodes, y compris les poussins de caille chimères et d'étiquetage de teinture focale. Dans cet article, nous démontrons une méthode de préparation d'oeuf qui a été optimisé pour les temps de survie longue.
Abstract
L'étude du développement a été grandement facilitée par l'utilisation de l'embryon de poulet comme modèle expérimental. La facilité d'accès de l'embryon a permis de cartographier les expériences destinées cellulaires en utilisant plusieurs méthodes, y compris les poussins de caille chimères et d'étiquetage de teinture focale. En outre, il permet de perturbations moléculaires de plusieurs types, y compris le placement de protéines billes recouvertes et l'introduction d'ADN plasmidique en utilisant l'électroporation in ovo. Ces expériences ont fourni des données importantes sur le développement des systèmes nerveux central et périphérique. Pour beaucoup de ces études, il est nécessaire d'ouvrir la coquille et se refermer sans perturber la croissance de l'embryon. L'embryon peut être examiné à étapes successives de développement par la réouverture de la coquille. Bien qu'il existe plusieurs excellentes méthodes pour l'ouverture des oeufs de poule, dans cet article, nous démontrons une méthode qui a été optimisé pour les durées de survie longue. Dans cette méthode, l'œuf repose sur son côté et une petite fenêtre est coupé dans la coquille. Après la procédure expérimentale, le shell est utilisé pour couvrir l'œuf pour la durée de son développement. Effacer ruban de plastique recouvrant la coquille protège l'embryon et aide à retenir l'hydratation pendant le reste de la période d'incubation. Cette méthode a été utilisée à partir de deux jours d'incubation et a permis la survie à travers les âges mûrs embryonnaire.
Protocol
Discussion
Cette méthode permet des temps de survie à long suivantes manipulations expérimentales. Par exemple, la teinture-étiquetage études ont permis la survie à E10 ou tard dans une étude de la cartographie sort (1). En outre, il a été utilisé pour des études électroporation in ovo qui fournissent l'altération des niveaux d'expression des gènes et de développement requis pour procéder à des étapes ultérieures de développement (2-6). Cette technique de fenêtrage peut être utilisé en combinaison avec une procédure qui…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotating incubator | Profi | Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60% | ||
| 70 % EtOH | ||||
| gauze | ||||
| 3M plastic tape | ||||
| 10cc syringe | 1/egg | |||
| 18G needles | 1½ inch needle, 1/syringe | |||
| Dissection scissors | 4″ sharp straight blades | |||
| Fertilized Eggs |
References
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. . Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. . Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. . Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. . Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
