Analyses morphométriques des sections rétiniennes
Summary
Cette vidéo montre trois types d'analyses morphométriques de la rétine, qui comprennent la mesure de l'épaisseur de couche nucléaire interne, de quantifier le nombre de cellules ganglionnaires de la rétine (CGR) et de mesurer les tailles de CGR. La technique peut offrir une plate-forme simple mais scientifique pour analyses morphométriques.
Abstract
Les analyses morphométriques de sections rétiniennes ont été utilisés dans l'examen de maladies de la rétine. Pour des exemples, des cellules neuronales ont été considérablement perdu dans la couche de cellules ganglionnaires de la rétine (RGCL) chez le rat avec la N-méthyl-D-aspartate (NMDA) excitotoxicité induite par 1, la rétine d'ischémie-reperfusion 2 et le glaucome 3. Réduction de la couche plexiforme INL et interne (IPL) épaisseurs ont été inversés avec le traitement citicoline dans les yeux des rats soumis à l'excitotoxicité du glutamate acide kaïnique médiée par 4. Modification de la densité et la taille des soma RGC ont été observés avec différents traitements médicamenteux dans les yeux avec une pression intraoculaire élevée 3,5,6. Par conséquent, ayant des méthodes objectives de l'analyse des morphometries rétiniennes peuvent être d'une grande importance dans l'évaluation des pathologies de la rétine et l'efficacité des stratégies thérapeutiques.
La structure de la rétine est multi-couches et plusieurs différents types de neurones exier dans la rétine. Les paramètres morphométriques de la rétine comme le nombre de cellules, la taille des cellules et l'épaisseur des différentes couches sont plus complexes que le système de culture cellulaire. Dès le début, ces paramètres peuvent être détectés à l'aide d'autres logiciels d'imagerie commerciale. Les valeurs sont normalement de la valeur relative, et le passage à la valeur précise peut-être besoin de calcul plus précis. En outre, le tracé de la taille des cellules et la morphologie peuvent ne pas être exacts et suffisamment sensible pour l'analyse statistique, en particulier dans le modèle de glaucome chronique. Les mesures utilisées dans le présent protocole a fourni un moyen plus précis et facile. Et la longueur absolue de la ligne et la taille de la cellule peut être signalé directement et facile à copier d'autres fichiers. Par exemple, nous avons retracé la marge de la plupart des noyaux interne et externe dans l'INL et ont formé une ligne, puis en utilisant le logiciel pour dessiner un angle de 90 degrés pour mesurer l'épaisseur. Bien que sans l'aide du logiciel, la ligne peut-être oblique et l'évolution de l'épaisseur de la rétine peutne pas être reproductible parmi les observateurs individuels. En outre, le nombre et la densité de CGR peut également être quantifiée. Ce protocole diminue avec succès la variabilité dans la quantitation caractéristiques de la rétine, augmente la sensibilité dans la détection des changements minimes.
Cette vidéo démontre trois types d'analyses morphométriques des sections rétiniennes. Ils comprennent la mesure de l'épaisseur INL, quantifier le nombre de CGR et de mesurer les tailles de CGR en valeur absolue. Ces trois analyses sont effectuées avec l'enquêteur stéréo (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc.) La technique peut offrir une plate-forme simple mais scientifique pour analyses morphométriques.
Protocol
Discussion
1. Comment faire pour obtenir une mesure d'épaisseur plus précis?
Vous pouvez agrandir l'image en cliquant sur "Zoom" et faites un clic gauche dans la fenêtre de traçage. La frontière INL peut être vu clairement. Si la pointe de la ligne n'est pas à la frontière extérieure de l'INL, nous pouvons ajuster la ligne sous le mode d'édition. Après avoir ramassé la ligne concernée, faites un clic droit de la fenêtre de traçage et de choisir "Insérer u…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Le travail sur la recherche des yeux dans ce laboratoire est soutenu par la Fondation panaméricaine de la santé adjoint, Azalée (1972) Fonds de dotation, et le Fonds HKU des petits projets (20097176185).
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
References
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