Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama
Summary
Profilaktik ve terapötik aşılama çoğu zaman düğümleri ve bağışıklık hücrelerinin dolayısıyla kötü katılımını lenf nedeniyle aşının hafta drenaj güçlü bağışıklık tepkilerini uyarmak için başarısız olur. Lenf düğümlerine aşı doğrudan enjeksiyon ile, sözde lenf sistemi içi enjeksiyon, aşı etkinliği güçlü geliştirilebilir ve aşı doz azaltılabilir.
Abstract
Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu başarısı, antijen sağlayan hücreler, aranan bağışıklık yanıtlarının oluşturulması için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Gücü ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu veya frekans etkileşimlerin hem de mikro-, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel olarak enjekte edilen aşı sadece küçük bir kısmını, lenf düğümleri ulaştığında, fareler ve insanlarda aşı kasık lenf düğümleri, örneğin lenf sistemi içi enjeksiyonu içine aşı direkt enjeksiyonu ile yapılmıştır. İnsanlarda, prosedür ultrason tarafından yönlendirilmektedir. Farelerde, bir küçük (5-10 mm) bir kesik, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz hale anestezi uygulanmış hayvanların kasık bölgesinde yapılır ve aşı 10-20 ul'lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir.Kesik, cerrahi dikiş kullanarak tek bir dikiş ile kapatılmıştır. Fareler plasmid DNA, RNA, peptid, protein, parçacıklar ve bakteriler gibi yardımcı maddeler ile aşılandı ve aşıların her tür karşı bağışıklık karşılıklarının güçlü bir iyileşme gözlendi. Aşılama intralenfatik yöntem, geleneksel aşı yetersiz bağışıklık veya Müsait aşı miktarı sınırlıdır üreten durumlarda özellikle uygundur.
Introduction
Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu prosedürün başarısı, antijen sunan hücreler, T-ve B-hücresi tepkilerinin üretilmesi için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Buna ek olarak, dayanıklılık ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu ya da frekans gibi etkileşimlerin hem de mikro kendisi, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel bir doku içine enjekte edilen bir aşının sadece küçük bir kısmı, bir lenf düğümü ulaştığında, lenf düğümleri içine aşı direkt enjeksiyonu ile farelerde ve insanlarda ve aşılar, site bağışıklık cevapları oluşturulur edildi gerçekleştirilmiştir. İnsanlarda, prosedür ultrason da lenfatik sistem görselleştirme ve teşhis için görüntüleme maddeleri uygulanması için kullanılan bir prosedür ile yönlendirilir. Farelerde, prosedür invaziv. Burada, bir küçük (5-10 mm) incision, anestezi uygulanmış hayvanlar 1'in kasık bölgesinde yapılır, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz ve aşı 10-20 ul'lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir, 10 ul ilk enjeksiyon için kullanılır ve genç farelerde küçük lenf düğümleri ile, oysa 20 ul büyük lenf düğümleri lenf düğümleri daha büyük ya da zaten farede, enjekte edilebilir. İnsizyon edilebilir cerrahi dikişle, bir tek dikiş ile kapatılabilir. Bu yöntem ile, farenin plazmid DNA 2,3, haberci RNA 4, 1,3,5,6 peptid, protein, 7-10, 11, parçacıklar, bakteriler 12 hem de 7,13 ilave maddeler ve bağışıklık güçlü iyileşme ile aşılanmış olan aşıların her tür karşı tepkiler gözlenmiştir. Aşılama intralenfatik yöntemi geleneksel aşılama yetersiz bağışıklık üreten veya mevcut aşının miktarı sınırlı ya da ver olduğu durumlarda özellikle uygundurpahalı y. İnsanda, lenf sistemi içi aşılama yöntemi, alerji hastalara 14,15 ya da kanserli 16-21 olan hastalara uygulanmıştır. Mevcut kavramı intralenfatik yöntem, kas içi ve deri altı enjeksiyonlar gibi diğer enjekte edilebilir yöntemlere göre daha invaziv olmasıdır, ancak ağrı algısı, damar delinerek 15 sonra daha yüksek değildir. Bu lenf sistemi içi aşı koruyucu ve tedavi edici aşıların, özellikle diğer yöntemlere bir alternatif veya tamamlayıcı olacağı beklenmektedir. Bu makalede, lenf sistemi içi aşılama prosedürü farelerde gerçekleştirilir kadar ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Açıklanan tüm prosedürler, Zürih Kantonu Veterinerlik Kurumu tarafından onaylanan ve İsviçre federal kuralları ve bilimsel amaçlar için kullanılan hayvanların korunması ile ilgili direktifleri göre yapılmıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Lenf içine aşılama ve immünoterapi antikor karşılıkları ve T-hücresi tepkilerinin her ikisinin stimülasyonu için uygun olduğu gösterilmiştir. Bu video-makale de gösterildiği gibi, aşı intralenfatik prosedür farelerde güçlü bir immün yanıtları stimüle etmek için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Eğitimli bir cerrah 3-4 dakika boyunca yordamı gerçekleştirebilir. Oturumda ayrıca bir genellikle anestezi ve dikiş atılmasını yapıyor ve ikinci cerrah kesi ve enjeksiyon yapıyor, iki cerrahla…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Iris Erdmann'a, Barbara von Beust ve Julia Maria Martínez-Gómez farelerde intralenfatik bağışıklama yöntemini gelişmekte deneysel yardım için minnettarız. Bize bu video üretimi için kendi cerrahi tiyatro bildirdiğiniz için de Maggy Arras ve Nikola Cesarovic teşekkürler.
Materials
| Ketamine (Ketasol-100) | Graeub AG, Switzerland | Anesthetics | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer, Germany | Anesthetics | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Switzerland | To keep eyes from drying out during anesthesia. | |
| BD Micro-Fine 0.5 ml | BD Medical, France | 29 G Insulin syringes with permanently attached needles | |
| 6-0 Dermalon Monofilament nylon | Covidien, MA, USA | For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue) | |
| Curved forceps, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision and holding of lymph node | |
| Straight surgical scissors, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision | |
| Needle holder, 5.5 inch | Polymed, Switzerland | To close incision with suture | |
References
- Johansen, P., et al. Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity. Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).
- Maloy, K. J., et al. Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).
- Smith, K. A., et al. Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides. Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).
- Kreiter, S., et al. Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity. Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).
- Johansen, P., et al. Antigen kinetics determines immune reactivity. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).
- Smith, K. A., et al. Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors. Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).
- Johansen, P., et al. Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy. Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).
- Johansen, P., et al. Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens. Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).
- Martinez-Gomez, J. M., et al. Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy. Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).
- Martinez-Gomez, J. M., et al. Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy. Allergy. 64, 172-178 (2009).
- Mohanan, D., et al. Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems. J. Control Release. 147, 342-349 (2010).
- Waeckerle-Men, Y., et al. Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis. Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).
- von Beust, B. R., et al. Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration. Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).
- Senti, G., et al. Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections. J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).
- Senti, G., et al. Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).
- Lesterhuis, W. J., et al. Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients. Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).
- Fadul, C. E., et al. Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy. J. Immunother. 34, 382-389 (2011).
- Eizenberg, P., et al. Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina. Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).
- Durando, P., et al. Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine. Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).
- Barth, R. J., et al. A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival. Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).
- Schwaab, T., et al. Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients. Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).
- Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. Intralymphatic immunotherapy. Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).
- Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen. Immunity. 21, 341-347 (2004).
- Itano, A. A., Jenkins, M. K. Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node. Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).
- Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. Lympho-geographical concepts in vaccine delivery. J. Control Release. 148, 56-62 (2010).
- Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. New routes for allergen immunotherapy. Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).
- Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).
- Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines. Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).
- Ribas, A., et al. Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial. Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).
- Bedrosian, I., et al. Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients. J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).
- Lesimple, T., et al. Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects. Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).
- Brown, K., et al. Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys. J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).
- Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients. J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).
