الدهليزي Schwannomas (VSS) هي أورام غير خبيثة من خلية شوان (SC) الأصل، ويرتبط مع طفرات في الجينات الكابتة للورم NF2. نحن الإبلاغ عن استنساخه، بروتوكول فعالة لالإنسان الأساسية VS ثقافة الخلية التي تسمح للتلاعب التجريبية الجزيئية والخلوية والتحليل ويلخص طبيعة غير متجانسة من الأمراض التي تصيب البشر.
schwannomas الدهليزي (VSS) تمثل خلية شوان (SC) أورام العصب الدهليزي، المساومة 10٪ من جميع الأورام داخل الجمجمة. VSS تحدث في (نوع الورم العصبي الليفي 2، NF2) أشكال إما متفرقة أو العائلية، سواء المرتبطة تعطيل عيوب في الكابتة للورم NF2 الجينات. العلاج لVSS عموما استئصال الجراحي أو الشعاعية، ولكن الاعتلال مثل هذه الإجراءات قد قاد التحقيقات في علاجات أقل الغازية. تاريخيا، وعدم الحصول على عينات أنسجة جديدة، وحقيقة أن الخلايا شفاني لا خلد أعاقت بشكل كبير من استخدام الثقافات الأولية للتحقيق في شفاني تكون الأورام. للتغلب على إمدادات محدودة من الثقافات الأولية، تم إنشاء خط الخلية HEI193 VS خلده تنبيغ مع فيروس الورم الحليمي البشري E6 E7 والجينات المسرطنة. أدخلت هذه التعديلات أنكجنيك تنبيغ الجزيئية والمظهري كبيرة في الخلايا، والتي تحد من استخدامها كنموذج ليالي الإنسانالأورام chwannoma. وبالتالي فإننا توضيح مبسط، بروتوكول استنساخه لثقافة الإنسان الأساسية VS الخلايا. يتقن هذه التقنية بسهولة يسمح للتحقيقات الجزيئية والخلوية التي ألخص أكثر دقة تعقيد المرض VS.
schwannomas الدهليزي (VSS) تمثل خلية شوان (SC) أورام العصب الدهليزي، المساومة 10٪ من جميع الأورام داخل الجمجمة 1-3. VSS تحدث في (نوع الورم العصبي الليفي 2، NF2) أشكال إما متفرقة أو العائلية، سواء المرتبطة تعطيل عيوب في الكابتة للورم NF2 الجينات. العلاج لVSS عموما استئصال الجراحي أو الشعاعية، ولكن الاعتلال مثل هذه الإجراءات تشمل الصمم، واعتلال الأعصاب في الوجه، وتسرب السائل الشوكي، وعدم التوازن، وإعادة نمو الورم 1. بالإضافة إلى ذلك ليس كل المرضى المرشحين الجراحية أو الإشعاع مقبولة. مثل قسط كبير من المراضة وكذلك عدم وجود العلاجات البديلة قد قاد التحقيق في البيولوجيا الجزيئية فريدة من VSS أملا في تطوير علاجات جديدة 3،4.
يسمح زراعة الخلايا لتحليلها السريع، السهل، ومتعمقة للسلوك الجزيئية والخلوية وفحص كوم العلاجية المحتملةجنيه. تاريخيا، وعدم الحصول على عينات أنسجة جديدة، وحقيقة أن الخلايا شفاني لا خلد أعاقت بشكل كبير من استخدام الثقافات الأولية للتحقيق في شفاني تكون الأورام. للتغلب على إمدادات محدودة من الثقافات الأولية، تم إنشاء خط الخلية HEI193 VS خلده تنبيغ مع فيروس الورم الحليمي البشري E6 E7 والجينات المسرطنة 5. أدخلت هذه التعديلات أنكجنيك تنبيغ الجزيئية والمظهري كبيرة في الخلايا، والتي تحد من استخدامها كنموذج للأورام شفاني الإنسان. SC الثقافات المستمدة من خطوط الماوس المعدلة وراثيا التي تفتقر إلى الجين NF2 وظيفية تمثل بديلا آخر للتحقيق NF2 التي تعتمد SC تكون الأورام في المختبر. ولكن هذه الثقافات تفشل في ألخص طبيعة غير متجانسة من VSS الإنسان أو حساب لسلوك معين الإنسان. معظم تقنيات الثقافة VS السابقة المطلوبة أوقات المعالجة طويلة نسبيا ومعقدة تقنيات ثقافة انتقائية 6-8.هنا نقدم، بروتوكول بسيط لاستنساخه الأولية VS ثقافة الخلية مع معالجة كاملة في أقل من 3 دقائق، مع 95٪ النقاء الخلية السرطانية على النحو الذي يحدده المناعية.
تاريخ الثقافات في المختبر شفاني
بدأت الجهود الرامية إلى إنشاء المختبر في الثقافات شفاني فقط بضعة عقود بعد بأورام في العصب السمعي الأولي وقعت استئصال الجراحي المفتوحة في عام 1894 12. كانت الثقافات سجلت أول م…
The authors have nothing to disclose.
الدعم: NIDCD R01DC009801، P30DC010362، 5T32DC000040-17
Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
Small Scissor | FST | 14058-11 | |
Small Forceps | FST | 11251-20 | |
Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
#11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
Insulated Ice Cooler | |||
Culture Hood | Baker | ||
Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |