장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

Summary

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Abstract

장 림프 시스템은 유체 수송, 지질의 흡수와 면역 기능에 중요한 역할을한다. 림프 장간막 림프절 덕트 수렴 림프관 및 일련의 노드를 통해 소장에서 직접 흐른다. 장간막 림프절 덕트의 캐 뉼러 따라서 소장에서 흐르는 장간막 림프절의 수집을 할 수 있습니다. 장간막 림프 및 지단백 분획 (지질, 친 유성 분자와 아포 단백질) (사이토 카인과 장 호르몬 등의 유체, 펩타이드 및 단백질) 면역 세포 (99 % 림프구), 수성 부분의 세포 부분으로 구성되어 있습니다. 장간막 림프절 덕트 삽관 모델 따라서 림프계를 통해 농도 및 소장에서 다양한 요인의 이송 속도를 측정하는데 사용될 수있다. 다른 도전에 대한 응답에서 이러한 요소의 변경 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 (예를 들어, 염증성 장 질환, HIV는 당뇨병)도 수 b전자는 결정. 관심을 확대 영역은 장 지질 흡수 경로와 연관 경구 투여 친 유성 약물과 전구 약물의 흡수에 림프 수송의 역할이다. 여기에 우리가 설명, 세부 사항, 장 배달 다음 몇 시간 동안 림프 시스템을 통해 속도와 지질 및 약물 수송의 정도의 평가를 할 수있는 장간막 림프절 덕트 유관 쥐 모델. 방법은 림프 다른 파라미터의 측정에 용이하게 적응할 수있다. 우리는 실험 성공을 확인하고 얻은 데이터를 해석하는 방법에 대한 교육을 제공하기 위해이 복잡한 수술 방법을 설정할 때 발생할 수있는 문제에 대한 자세한 설명뿐만 아니라, 실패와 성공의 실험에서 대표 데이터를 제공합니다.

Introduction

림프는 각 소장 융모 ^1에 포함 된 단일 lacteals에서 유래 단방향 프로세스를 통해 소장에서 흐른다. Lacteals 따라서 유체, 거대 분자 및 세포 림프 형성에 상대적으로 투과성 lacteals에 이러한 요소의 항목으로 시작한다. lacteals의 초기 림프 이후 림프 미세 혈관의 네트워크, 수집 (구 심성) 림프관, 장간막 림프절 궁극적으로 사후 노드 (원심성) 림프 혈관의 시리즈를 통해 소장에서 흐른다. 노드 내 림프 교환 혈액에서 노드를 입력 노드에 상주 면역 세포뿐만 아니라 물질로 발생하는 수질 부비동의 시리즈를 통해 전달합니다. 소장에서 흐르는 모든 림프 결국 원심성 장간막 림프절 덕트 및 이후 치스 테르 나디 라티 나에 chyli에 수렴한다. 치스 테르 나디 라티 나에 chyli 또한 림프 꼬리 주변 조직을 배출, intest를 수집원고 판은, 간 및 요추 지역과는 종격동과 몸의 뇌 부분에서 림프와 함께 흉부 림프 덕트를 결합한다. 흉부 림프 덕트는 왼쪽 경정맥과 쇄골 하 정맥의 교차점에 정맥 시스템에 직접 림프를 비 웁니다. 장간막 림프절에서 직접 림프 덕트의 수집을 가능하게 기재되어있는 프로토콜, 따라서 장 림프계를 통해 전신 (일반)에 순환 부위에서 직접 천이 다양한 인자의 분석을 용이하게한다.

장내 림프계에 할당 중요한 생리 학적 기능은 유체 밸런스를 유지하기 위해 지질 친 유성 분자의 흡수를 용이하게하기 위해, 적절한 ^한 면역 ^반응을 활성화한다. 종양 세포와 바이러스는 ^2-4 및 주요 변경 사항은 여러 가지 염증 및 대사 병리 ^5-7 림프관 내에서 발생하는 장 림프관을 통해 전파. 수장간막 다양한 세포 및 분자의 농도 및 전송 속도의 장 림프관을 통한 벌크 유체 흐름의 분석뿐만 아니라 정량을 가능 장간막 림프절 내에 덕트 nulation은 림프를 수집한다. 다양한 문제 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 모델에 대한 응답으로 농도 또는 이러한 요소의 대중 교통에 대한 변경 사항은 (예를 들어, 대장염, HIV, 당뇨병)도 평가 될 수있다. 이 광범위하게 분석하고 여기에 비교 될 수있다 각 림프 구성 요소를 설명하는 것은 불가능 동안, 장간막 림프절은 단순하게 수성, 지질 및 세포 단계로 구성된다. 성상에 대한 관심의 구성 요소는 항원 또는 tolerogens ^8, 사이토 카인 및 비만 세포 매개 ^(9), 및 인크 레틴 ¹⁰ 대사 매개 면역 메신저로 펩타이드 및 단백질을 포함한다. 포스트 마디 장간막 림프절의 세포 분획 lymphocyt의 (99 %), 거의 전적으로 구성되어ES ^(11). 다양한 면역 세포 (수지상 세포, 비만 세포, 등)은 사전 마디 장간막 임파선를 입력하지만 노드 ⁽¹²⁾ 내에 남아있다. 심성 림프 세포 내의 관심있는 경우, 장간막 림프절의 제거를 통해 이러한 세포를 수집 할 수있다 장간막 림프절 덕트 ^(12)의 삽관 전에 몇 일 노드. 이러한 방식으로, 구 심성, 원심성 및 림프 도관에 직접 연결되고 심성 림프에서 임파구는 장간막 림프절 도관에 직접 전달한다. 장 림프관 통과 다양한 면역 세포의 표현형 및 운송 따라서 검사 할 수있다. 아마도 현재까지 장간막 림프절을 수집하기위한 인용 가장 일반적인 이유는, 그러나, 처리 장내 흡수식이 지질 친 유성 분자 ^(10)의 수송을 연구하는 것이다.

섭취 후,식이 지질은, 예를 들면, 트리글리 세라이드의 지방산과 모노 글리세리드, phosp로 (소화지방산 및 리소 인지질, 지방산 및 콜레스테롤 등) 콜레스테롤 에스테르로 holipid 담즙에서 양친의 첨가를 통해 작은 미셀 포성 구조로 장내 루멘 내에 분산 (인지질, 콜레스테롤 및 담즙 염)과의 작용 췌장 효소 ^{(10, 13).} 여기에서 그들은 장 세포로 흡수된다. 흡수 성분의 비율은, 흡수성 세포 (장 세포) 내 트리글리 세라이드, 인지질 및 콜레스테롤 에스테르를 형성하기 위해 재 에스테르 화. 이러한 재 – 에스테르 화 된 지질은 담즙 분비, 점막 지질 풀 또는 장내 혈액 ^{(13)로부터} 공급 외생 섭취 지질 성분 및 내인성 지질 성분의 조합으로부터 조립된다. 여기에서, 에스테르 화 지질 어느 장 세포 내에 저장되어 있거나 함께 다양 아포 단백질과 다른 분자와의 친 유성 장내 지단백질 (칠로 마이크론, 초 저밀도 지단백질 (VLDL)) (조립 <em> 예를 들어, 비타민) ^{(10, 13).} 장 lacteals이 장 모세 혈관보다 자신의 항목 침투성이 더으로 장 세포를 종료 한 후, 지질 단백질은 특히 장간막 림프 시스템을 통해 전신 순환 장에서 수송된다. 흡수 된 지질 성분의 비율은 또한, 관련되지 않은 단일 지단백질 모세 혈관과 간문맥 통해 체순환으로 소장에서 반송 ¹⁴ 분자이다. 그러나, 일반적으로, 간문맥 수송로 짧고 중간 사슬 길이 지질의 흡수에만 상당한 플레이어이다.

장간막 림프절의 컬렉션은 따라서 소장에서 지질 단백질 및 관련 구성 요소 (지질, 친 유성 분자, 아포 단백질)의 전송에 대한 평가를 할 수 있습니다. 지단백질 정량화 및 장간막 임파선 지단백질, 일반적 nascen에 유리하게 특성화 될 수있다t 상태 그들은 광범위하게 이러한 지단백 리파제 ⁽¹⁵⁾ 전신 효소에 의해 수정되지 않은 때문이다. 장간막 림프절 삽관 된 래트 모델은 아마도 역사적으로 가장 광범위 소장에서 지질 / 지단백 교통 분석에 기술 된 반면, 관심을 확대 영역은 지용성 약물, 전구 약물 및 다른 생체이 ^13,16의 수송 림프관의 역할은 여기에서 설명하는 모델의 초점이다. (일반적으로 긴 사슬 중성 지방> 50 ㎎ / g에서 로그 P> 5 용해도의 예외가 분명 있지만) 친 유성 약 ^{17, 18, ​​19} 및 기타 생체이 ^{13, 16} 중 ^하나를 수동적으로 또는하여 장 림프관에 액세스 할 수 있습니다 드럭 적극적으로 장 지단백 전송 경로 ^(19)에 통합.

쥐 장간막 림프절 삽관 기술은 이렇게 많은 응용 프로그램이 있습니다. 볼만 등 알. 먼저 techniq 설명변형 모델의 다음 번호가 설명 되었기 때문에 단말. 1948 ²⁰ 래트에서 장간막 림프절 덕트 cannulate한다. 쥐 다양한 마취제 ^{(21, 22)로} 마취 할 때 예를 들어, 수집이 발생할 수 있습니다, 또는 의식 상태에있는 동안은 ^{(23, 24)를} 이동 ¹⁵ 자유롭게을 억제. (- 5 ㎖ / hr로 대개 0) ²⁵ 래트 재수 다른 솔루션과 같은 위장, 소장 또는 비경 다른 속도로 지질 및 약물 제제와 같은 다른 물질을 투여 할 수있다. 몇몇 연구에서는 흉부 림프 덕트보다는 장간막 림프절 덕트 흉부 림프 덕트는 서로 림프를 받으면이 관심 요인에 따라, 소장에서 운송 과대 수도 있지만, 림프관을 통해 소장에서 전송을 추정 삽관 지역 ^{22, 26.} 림프 삽관 모델은 쥐 ^15,27, 미니 PI 등 여러 가지 다른 종에서 기술 된GS ^12, 양 ^{28, 29,} 돼지 ³⁰ 개 ^(31). 그러나, 래트 모델은 가장 널리 일관 인용. 의식이 ²⁵ 림프의 수집 뒤에 또는 ²² 쥐 ^15,27을 마취 장간막 림프절 덕트의 삽관에 대한 자세한 프로토콜은 이전에 출판되었으며, 관심있는 독자는 이러한 프로토콜에 관한 것이다. 이 프로토콜은 시각화 형식으로 기술을 보여 처음이다.

림프 삽관 된 래트 모델은, 비용면에서 수술 윤리적 고려 용이성 큰 동물 모델에 비해 이점을 갖는다. 마우스 모델에 비해 마우스 모델은 트랜스 제닉 동물 ^(27)에서 더 상세한 연구를 가능하게하더라도, 장간막 림프절 삽관 수술은 또한 쥐 쉽다. 그럼에도 불구하고, 쥐 모델, 생리의 차이와 관련된 특히, 그 한계 extrapolat의 몇 가지 제한 사항이 있습니다다른 전임상 및 임상 상황에 이온. 예를 들어, 쥐 담즙 흐름에 상수 및 높은 종 식품 반면 식품 섭취 또는 지질 독립적 담즙 흐름 ^(32)를 자극한다. 이것은 큰 종과 인간에서 볼 반영 쥐의 대표 사전 및 식후 환경을 얻기에 어려움을 만듭니다. 현실적인 인간의 투여 량의 투여 ^25을 형성 한 후 림프 전송을 평가할 때 약물 전달 연구의 경우, 큰 종은 또한 바람직 할 수있다. 최근 연구에서, 장간막 림프절에서 지질 전송 속도는 종 ^(27)에 걸쳐 지질 전송 데이터를 외삽에 자신감을 제공하는 등가 질량과 지질의 종류를 투여 한 후 종 (마우스, 쥐, 개)에 걸쳐 유사한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 동물의 크기 (즉, 개> 쥐> 마우스)의 순서로 순위 모델 지용성 약물, 할로 판 트린의 전송. 스케일링 인자 따라서 EX해야 할 수도다른 종 쥐에서 임파 약물 전송 데이터인지 추정.

림프 삽관 모델의 제한은, 일반적으로, 림프관은 용기 ^(33)를 캐 뉼러를 한번 변경되는 압력 구배에 반대 보낸 림프 흐름 및 전송을 수정할 수 림프관부터 직접 해당 수동 림프 컬렉션이다. 림프 삽관 모델은 기술에 익숙하지 않은 실험실에서 파악하는 작업이 쉽지 않을 수도 있습니다. 대체 모델은 따라서 설명되었다. 예를 들면, 지질 단백질 및 친 유성 분자로서 장내 림프계를 통해 요인 통과 간접적 혈액의 컬렉션을 통해 연구되어왔다. 그러한 모델 오랄 존재 관리 및 억제제의 부재 다음과 같은 지질 및 / 또는 약물의 혈중 농도를 비교 포함한다 (예를 들면, 콜히친, 플루 L81, 사이클로 헥시) 림프 전송 블록 ³⁴ 장 지질 단백질 생산. 장점혈액 샘플 수집을 통해 간접적으로 림프 전송을 정량화 모델의 침습 수술이 ³⁵ 필요하지 않습니다으로는 인간의 림프 수송의 어떤 평가를 할 수 있다는 것입니다. 그러나, 림프 교통 억제제는 특정하지 않은 및 림프관을 통해 수송된다 요인이 희석과 같은 평가를 복잡하게 전신 순환에 수정됩니다. 체외 대안도 설명 하였다. 예를 들어, 카코 -2 세포 또는 격리 장 세포 배양 물보다 상세히 림프관 ^36-38 입력 분자의 장내 분비를 연구하기 위해 사용되어왔다. 인간의 장내 미세보다 잘 나타내는 고급 체외 모델은 최근 ³⁹ 설명했다. 이 모델에서 림프관 내피 세포층 림프관으로 소장에서 물질 전달의보다 상세한 분석이 가능 카코 -2 세포와 공 배양된다. 그러나, vitr에서오 전지 시스템은 교환 흐름을 부족 및 장 루멘과 기본 혈액과 림프 혈관 공급 즉, 상호 연결을 전송합니다. 대안적인 접근법에서, Kassis는 외. 혈관 수축, 림프 흐름 및 장간막 림프관 ³³ 형광 지질 농도 사이의 양적 비교를 가능 시츄 촬상 시스템의 듀얼 채널 (고속 명 시야 화상과 형광)을 설치했다. 시험 관내 시스템에서의 상기 이상이 모델의 이점은 림프관을 통한 면역 세포의 통로의 정확한 추적을 가능하게한다는 것이다. 대량 지질 (또는 약물) 전송의 절대 측정은, 그러나, 아직 이미징 방법을 사용하여 설립. 시험관과 실리에 구체적으로도 ^{40 ~ 42을} 게시 한 장 림프관을 통해 친 유성 약물 수송의 정도를 예측하기 위해 접근되지 않습니다. (C)의 여러 예를 들어, 생체 친 화성플라즈마 카일로 마이크론에 대한 ompounds 생체 ^{(41)에서의} 림프 전송으로 합리적으로 상관 관계가 밝혀졌다. 이어서, 동일 그룹들은 다수의 물리 화학적 특성에 기초하여 ⁴⁰ 킬로 미크론 치료약 친 화성을 ​​예측하기 실리 모델을 확립. 홀름 등. 또한 명백한 분자량 디스크립터 ^(42)의 기초 림프 친 유성 화합물의 수송을 예측 모델에 실리 비교적 복잡한 설립. 이러한 모델은 알려지지 약물 수송 림프관의 정도를 예측하기위한 유용한 방법을 제공 할 수있다. 약물 및 다른 실험실에 걸쳐 광범위한 모델 검증 그러나, 정확성 및 재현성을 확인하기 위해 필요할 것이다.

장간막 림프절 덕트 삽관 따라서 직접 소장 및 인자 (세포 단백질의 복소 배열의 운송 속도를 배수 림프절의 내용을 검사 할 수있는 유일한 수단 남아생체 내 상황에서 림프 펩타이드, 지질, 약물). 여기에서 우리는 장간막 림프절 및 마취 쥐 전신 혈액의 수집을 가능하게하는 장간막 림프절 덕트 및 경동맥 동맥 삽관을위한 프로토콜을 설명합니다. 대표 데이터는 모델 장간막 림프계를 통해 소장에서 지질 및 약물 수송을 검사 할 수있는 방법을 보여준다. 이 모델과 문제 해결 가이드를 확립 발생할 수있는 문제에 대한 논의가옵니다. 설립되면 모델은 장 림프 전송을 조사하는 강력한 도구입니다.

Protocol

이 논문에 기술 된 연구는 지역의 동물 윤리위원회의 승인을하고, 연구 및 교육 지침에 동물의 관리에 대한 호주와 뉴질랜드위원회에 따라 실시 하였다. 모든 동물의 절차를 시작하기 전에 적절한 권한 로컬 기관 / 조직을 통해 얻을 수 있는지 확인합니다. 모든 동물 수술과 마찬가지로 수술은 무균 조건에서 윤리적이고 성공적인 결과를 보장하기 위해 필요한 경우 마취제, 진통제와 항생제 투여?…

Representative Results

대표적인 실험의 결과는도 4 및도 5에 도시되어 장간막 림프절 삽관 모델을 이용하여 장내 전달 다음 림프계를 통해 누적 범위와 지질 및 약물 수송 속도를 정량화한다.이 실험에서, 모델 친 유성 200 μg의를 포스페이트 완충에 5.6 ㎖의 5 mM의 나트륨 타우로 콜산에 분산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 – 약물 할로 판 트린 40 mg의 올레산 (5 μCi를 14 C-올레산 2 포함) 아세트산 함유 제제?…

Discussion

쥐 장간막 림프절 삽관 모델은 다양한 물질로 도전하는 농도와 다양한 세포와​​ 소장에서 림프에 응답하여 발생하는 이들에 대한 변경 (예 : 지질 및 약물 등) 분자의 전송 속도를 직접 정량화 할 수 있습니다 (다이어트 항원 약물, 제형 등) ^10,27 질병 (암, 바이러스, 대장염, 인슐린 저항성 등) ^5-7. 림프 수집 성분은 또한 상기 추가의 실험에 이용 될 수있다. 예를 들?…

Materials

Sterile saline	Baxter healthcare	AHB 1307	Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50
70 % ethanol in water	Any		Any brand can be used
Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4)	Livingstone International	JJ60243L	Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
Betadine solution	Livingstone International	BU0510	Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	TRO-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml)	PROVET VICTORIA	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Sodium pentobarbitone	PROVET VICTORIA	24529	Any brand can be used. Example here is Lethabarb® 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au
Heparin (35000I.U. in 35 mL)	Sigma Pharmaceuticals	337220	http://sigmaco.com.au/
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate	Sigma-Aldrich	E1644	Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma.
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm	Microtube extensions	PE8050	Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8×0.5 mm, 30 m
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm	Microtube extensions	PE9658	Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96×0.58 mm, 30 m
Ruler	Any		Any brand can be used
Markers	Any		Any brand can be used
Cigarette lighter	Any		Any brand can be used
Cyanoacrylate glue	Any		Any brand can be used
23 gauge needles	Livingstone International	DN23GX0.75LV	Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
25 gauge needles	Livingstone International	DN25GX1.0LV	Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1 ml syringe	Livingstone International	T3SS01TA	Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
10 ml syringe	Livingstone International	T3SS10SA	Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Gauze swabs	Livingstone International	GSC075	Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5×7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Cotton buds	Livingstone International	CTAST075DP	Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP
Heating pad	Ratek	WT1	Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.
Surgical light	Harvard Apparatus	72-0215 with 72-0267	Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail and  http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___
Surgical microscope	Zeiss	495005-0014-000	Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Silk suture	Livingstone International	DTSK163019F4	Any brand can be used. Example here is *  Email this item to my friend 3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
Scalpel blades	Fine Science Tools (FST)	10020-00	Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Scalpel handle	Fine Science Tools (FST)	10004-13	Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Small surgical scissors	Fine Science Tools (FST)	14060-09	Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Forceps with serrated curved tip	Fine Science Tools (FST)	11001-13	Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8×1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 x Iridectomy scissors	Fine Science Tools (FST)	15000-08	Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors – 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16
1 x Forceps with straight serated tip	Fine Science Tools (FST)	11650-10	Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip	Fine Science Tools (FST)	11251-10	Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x Forceps with smooth fine curved forceps	Fine Science Tools (FST)	11063-07	Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
2 x Hemostats	Fine Science Tools (FST)	13010-12	Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example here is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x Suture needle holder	Fine Science Tools (FST)	12001-13	Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 x Artery clamp	Fine Science Tools (FST)	18050-28	Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9×1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82
Oleic acid	Sigma Aldrich	O1008	When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU
14C-oleic acid	Perkin	NEC317050UC	Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50µCi (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC
Sodium taurocholate	Sigma Aldrich	T4009	Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate ≥95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU
Halofantrine	Glaxo Smith Kline		Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline
Sodium phosphate monobasic	Sigma Aldrich	71507	Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, >99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU
Sodium phosphate dibasic	Sigma Aldrich	71643	Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU