Este artigo de vídeo fornece uma demonstração detalhada das formalidades necessárias para remover com êxito o pâncreas de um rato por dissecação para análise histológica e perfis metabólicos.
Nós temos investigado o fator de transcrição específico do pâncreas, 1a cre-recombinase; sarcoma de rato LOX-paragem-lox-Kristen, glicina, ácido aspártico no codão 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) cepa de rato como modelo de câncer no pâncreas humano. O objetivo dos nossos estudos atuais é identificar biomarcadores metabólicos romance de progressão do câncer pancreático. Efetuamos a criação de perfil metabólico de urina, fezes, sangue e extratos de tecido do pâncreas, bem como a análise histológica do pâncreas para encenar a progressão do câncer. O pâncreas de rato não é um órgão sólido bem definido como nos seres humanos, mas pelo contrário, é um tecido mole difusamente distribuído que não é facilmente identificado por indivíduos que não estão familiarizados com a anatomia interna do mouse ou por indivíduos que têm pouca ou nenhuma experiência realizando dissecções de órgão do rato. O objetivo deste artigo é fornecer uma detalhada step-wise demonstração visual para orientar noviços na remoção do pâncreas rato por dissecação. Este artigo deve ser especialmente valioso para estudantes e investigadores de novo à investigação que requer a colheita do pâncreas de rato por dissecação para criação de perfil metabólico ou análise histológica.
O mouse tem emergido como um importante modelo animal de câncer no pâncreas humano1,2. No Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modelo do rato, a Kristen oncogene de sarcoma (K-Ras) de rato é ativado exclusivamente no pâncreas, resultando em iniciação de lesões pré-cancerosas no pâncreas, conhecido como neoplasias intra-epitelial pancreáticas (PanINs), que o progresso para adenocarcinoma ductal do pâncreas, comumente referido como PDACs3. Este sistema de modelo do mouse fornece dentre os melhores modelos animais disponíveis para4,câncer de pâncreas humano5, com a vantagem adicional dos PanINs emergem dentro os primeiros cinco meses de vida e, frequentemente, progresso a PDAC dentro um único ano4,5, Considerando que o câncer de pâncreas ocorre mais frequentemente em humanos 60-70 anos de idade.
Extração do pâncreas por dissecação do Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + ratos em várias idades permite detalhado exame histológico longitudinal do desenvolvimento de câncer no pâncreas, desde os primeiros estágios de PanIN através da progressão PDAC3,4 , 5. colheita do pâncreas em idades que variam de cinco a quinze meses também pode ser usada para preparar o tecido extratos para caracterizar mudanças globais no metabolismo de4 pâncreas que ocorrem durante a transição de saudável para o tecido doente 6,7.
Este artigo apresenta um guia visual completo das etapas necessárias para realizar uma extração de pâncreas de rato e fornece diretrizes para o armazenamento de um pâncreas para posterior análise. Este guia será igualmente valioso para indivíduos realizando pesquisa sobre outras doenças do pâncreas, incluindo diabetes tipo e devem ser especialmente útil para estudantes e investigadores novos para pesquisas envolvendo a colheita do pâncreas de rato usando dissecação para criação de perfil metabólico ou análise histológica.
Importância no que diz respeito a métodos existentes
Enquanto existem outros vídeos informais de dissecções de rato, este artigo de vídeo fornece a primeira qualidade profissional, par-revistos, demonstração visual de todas as etapas detalhadas necessárias para extração e colheita do pâncreas rato por dissecação10 . Com o pâncreas é um órgão principal para a atividade metabólica e insulina produção, dissecção e colheita do pâncreas permite a preservaçã…
The authors have nothing to disclose.
MAK reconhece apoio para este trabalho a partir do National Institutes of Health / número – 1R15CA152985-01A1 de concessão do National Cancer Institute. Este projeto também foi apoiado pela Miami University graduação prêmio programa de pesquisa, as oportunidades de doutorado-graduação de Universidade de Miami para programa de bolsas e o programa de estudiosos de Verão de Universidade de Miami.
Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
Foam Boards | Therapak | 562908 | |
Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |