نيوفاسكولاريزيشن آيريس، مضاعفة شائعة لترويه الشبكية، قد يؤدي إلى الزرق نيوفاسكولار تهدد البصر. هنا، يمكننا وصف بروتوكول مورين لحمل neovascularization آيريس التجريبية التي يمكن استخدامها لتقييم موسع للأوعية تحوير المواد.
يصف لنا نموذج نيوفاسكولاريزيشن التي يسببها ثقب القزحية كنموذج عام لتقييم موسع للأوعية. هذا النموذج أيضا ذات الصلة لاستهداف نيوفاسكولار الزرق، مضاعفات التي تهدد البصر لاعتلال الشبكية السكري. هذا الأسلوب يرتكز على استحثاث آيريس استجابة الأوعية الدموية بسلسلة من ثقوب uveal الختم الذاتي على الفئران بالب/ج، ويستفيد من نضوج المفرج العين الماوس بعد الولادة. ويخضع الجراء الماوس ثقوب uveal من يوم الولادة 12.5، عندما فتح الجراء عيونهم، حتى يوم الولادة 24.5 بطبيعة الحال. نظراً لشفافية القرنية، القزحية المفرج يمكن تحليلها بسهولة عبر الزمن بأساليب موسع في فيفو . علاوة على ذلك، يمكن أن يكون شبه شفاف قزحية بالب/ج الفئران فلاتمونتيد لتحليل إيمونوهيستولوجيك مفصلة مع تلوين الخلفية غير محددة الحد الأدنى. في هذا النموذج، تولد الأوعية هو أساسا مدفوعا التحريضية وتفعيل نظم البلاسمينوجين. نموذج المستحثة بثقب هو الأول من حمل neovascularization آيريس في القوارض الصغيرة، وفي الاستفادة من السماح المباشر موسع في فيفو تحليل عملية الأوعية. وعلاوة على ذلك، يمكن ضم النموذج مع الأوعية تحوير المواد، الذي يسلط الضوء على إمكاناتها في دراسة الأوعية مع وجهة نظر في فيفو .
وتضم قزحية العين، جنبا إلى جنب مع الجسم الهدبي والمشيميه، عنبية، الذي هو أكثر vascularized أنسجة العين. المفرج آيريس ضروري للحفاظ على التوازن في الغرفة الأمامية للعين. نتيجة لوفرة اتصالات أناستوموتيك بين الشرايين والاوردة، الأوعية الدموية آيريس توفير المواد الغذائية وإمدادات الأوكسجين إلى قزحية العين نفسها، بل في كامل الجزء الأمامي من العين1.
تشكيل أوعية دموية جديدة، أو الأوعية من تلك القائمة من قبل، هو أمر أساسي في العمليات الفسيولوجية، مثل التنمية والجرح الشفاء2. وتولد الأوعية ناعما ينظم العديد من العوامل المتعارف عليه، مثل عامل نمو الأوعية الدموية غشائي (VEGF) ومثبط منشط البلاسمينوجين (PAI)، فضلا عن عدة عوامل الالتهابات، واختلال هذه العوامل يمكن أن تؤدي إلى باثولوجي 3من الأوعية.
في العين، وهو نيوفاسكولاريزيشن سبب الأمراض التي تهدد البصر، مثل اعتلال الشبكية السكري التكاثري (PDR) والزرق نيوفاسكولار (نفج). في هذه أمراض العين، neovascularization التنسيق يقع عادة في أنسجة الشبكية، إلا أن عدم التوازن في الالتهابات والعوامل الأوعية في كلا الأمامي والخلفي العين دوائر العين ارتبط إيريديس روبيوسيس، مصطلح السريرية لايريس نيوانجيوجينيسيس المرضية4. وتبين هذه الأمراض قدرة القزحية الكبار الخضوع لتولد الأوعية. في الفئران، غير ناضجة المفرج العين بعد الولادة ويستمر نضج بعد الولادة. هو استغلال هذا خصوصية للتنمية في طراز الماوس الأوكسجين الناجم عن اعتلال الشبكية، نموذج الذي يحاكي عن كثب الحالة السريرية لاعتلال الشبكية الخداج5. وباﻹضافة إلى ذلك، تولد الأوعية والتهاب تلعب دوراً محوريا في الجرح الشفاء الآليات6، والجرح شفاء نفسها تم إقرانها مع الأوعية نماذج7.
في هذه الدراسة، يصف لنا نموذج نيوفاسكولاريزيشن التي يسببها ثقب القزحية. وتجري ثقوب uveal قرب الحد الخارجي ليمبوس، الذي حمل neovascularization آيريس بأحداث الجرح الشفاء النظام. يمكن أن يكون سبب شفافية القرنية، القزحية المفرج تحليلها بسهولة في فيفو بأساليب موسع. عيون ثقب الحالي أي بزيادة قدرها سرير الأوعية الدموية في القزحية، التي ارتبطت بزيادة تنشيط البلاسمينوجين وعلامات التهابات8. نموذج عرض إمكانات كبيرة كأداة جديدة لدراسة الأوعية وفحص المركبات الأوعية، ويسمح مباشرة في فيفو التصور عمليات الأوعية.
ويرد في هذا البروتوكول، طريقة جديدة لتحريض آيريس استجابة الأوعية الدموية بثقب uveal. يقوم بتشغيل آليات شفاء الجرح الثقب ويعزز استجابات الأوعية الدموية في10،آيريس11. وهذا ما يتفق مع أمراض العين، مثل الديمقراطية الشعبية ونفج، حيث تتوج استجابات الأوعية تفاقم من …
The authors have nothing to disclose.
يشكر المؤلفون ينيا تانكرد وريدهولم ديانا لتربية الحيوانات.
Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |