上阴区域的瞬态受体电位瓦尼洛伊德类型1(TRPV1)已被建议在大脑功能中发挥一些作用。此处描述的是用于小鼠超针TRPV1脱敏的树脂叶铁通毒素的针心通泡注射方案。还介绍了一些疼痛测试的程序。
瞬态受体电位瓦尼洛伊德类型 1 (TRPV1),热敏阳离子通道,已知会触发周围神经疼痛。除了其外周功能外,还建议它参与大脑功能。树脂叶毒素(RTX),一种超能TRPV1激动剂,已知会导致TRPV1的长期脱敏,这种脱敏性一直是研究TRPV1表达细胞生理相关性的替代方法。在这里,我们描述了小鼠用RTX治疗的内脑血管(即c.v.)治疗方案。介绍了用于测试外围TRPV1刺激(RTX测试)和机械刺激(尾压测试)的发音的程序。虽然被施用RTX i.c.v.的小鼠的诱导反应与对照组相当,但RTX-i.c.v.管理的小鼠对对乙酰氨基酚的镇痛作用不敏感,这表明i.c.v.RTX治疗可诱发超针选择性TRPV1脱敏。该小鼠模型可作为研究TRPV1在脑/超功能中的作用的便捷实验系统。这些技术也可以应用于其他药物的中心行动的研究。
动物通过周围神经上的传感器从环境中获得各种物理和化学刺激。瞬态受体电位瓦尼洛伊德类型1(TRPV1)是热敏、非选择性阳离子通道之一,充当热传感器1、2,TRPV1的激活和/或调制是正常和炎症环境中的发音的关键步骤。1虽然整体表达模式是有争议的,TRPV1的表达也建议在超平区,参与各种大脑活动(包括异常4,热调节5,焦虑6,注意力缺陷多动障碍7,癫痫8)。此外,最近有人建议,对乙酰氨基酚,一种广泛使用的止痛药,调解中央TRPV1的激活,以引出其镇痛作用9,9,10。
管理过量的TRPV1激动剂,包括辣椒素和树脂叶毒素(RTX)动物导致TRPV1阳性神经元的死亡和长期脱敏TRPV1激动剂11,12。11,结合局部应用(本级,13、14、,14内15、16、17和刚内18),这种化学消融方法为研究TRPV1的生理功能提供了另一种方法。16,17我们最近报告说,RTX的内脑血管注射抑制了对乙酰氨基酚在小鼠中的镇痛作用,建议超针选择性TRPV1脱敏19。在这份手稿中,我们提出了注射和随后的疼痛测试的精确方案。
将药物直接注射到大脑心室,可以研究其中心效应,同时将任何外周效应降至最低。这里介绍的注射程序是海利和麦考密克20所报告的方法的修改。这种方法很简单,通过日冕缝合将注射针插入横向心室,不需要任何特殊设备或外科手术。
TRPV1激动剂的外围局部应用引起灼痛感和神经原发性炎症。用RTX和TRPV1-KO小鼠进行系统治疗的小鼠对这种刺激13不敏感。我们已对RTX(RTX测试)进行了植物内注射,以确认在RTX-i.c.v中保留外设TRPV1。小 鼠。此方法是常规形式测试21的修改。
据报道,用RTX和TRPV1-KO小鼠进行系统治疗的小鼠表现出机械刺激11、13、22,13,的正常阈值。在这里,我们提出了一个尾压测试的程序,用于测试对乙酰氨基酚镇痛作用的变化。
所有这些程序都是正统和多才多艺的,可以应用于其他药物的研究。
在这些实验中,最关键的一步是注射成功。这里使用的 i.c.v. 注射技术非常简单,但需要一些练习。在实验之前,建议使用染料(例如盐碱中 0.5% 的蓝印)。如果注射执行正确,在日冕缝合上应明显有针斑,注射染料应存在于反边心室和第三心室。此外,在注射过程中应避免强行插入。如果针尖正确放置在牙冠缝合线上,针应顺利穿透头骨。
这种即认为技术也可以应用于清醒…
The authors have nothing to disclose.
没有。
Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |