La pneumonie infectieuse est parmi les infections les plus courantes chez l’homme. Un modèle approprié en vivo est essentiel pour comprendre la pathogenèse de la maladie et de tester l’efficacité de nouveaux médicaments. Avec ce modèle de pneumonie murine aspiration oropharyngée, on peut examiner la pathogénie et nouveaux traitements contre ces infections mortelles.
Modèles murins d’infection sont essentielles pour comprendre la pathogenèse de la maladie et de tester l’efficacité de nouveaux médicaments visant à lutter contre les agents pathogènes causatifs. Pneumonies infectieuses est parmi les infections les plus communes présentées par les patients à la clinique et garantit ainsi un modèle approprié en vivo . Les modèles de pneumonie typique utilisent l’inoculation intranasale, qui dépose des organismes excessives en dehors du poumon, provoquant des complications hors cible et symptômes, tels que la sinusite, gastrite, entérite, traumatismes physiques ou au moyen de microparticules brumisation pour imiter les aérosols diffusion plus typique d’une pneumonie virale, tuberculeuse ou fongique. Ces modèles ne reflètent pas exactement la pathogenèse de la pneumonie bactérienne typique ou soins de santé-extra-hospitalière. En revanche, ce modèle murin de pneumonie par aspiration oropharyngée imite l’itinéraire de gouttelettes en pneumonie soins de santé. Inoculant 50 µL de la bactérie suspension dans l’oropharynx de souris anesthésiés entraîne l’aspiration réflexive, qui se traduit par une pneumonie. Avec ce modèle, on peut examiner la pathogenèse des pathogènes qui causent la pneumonie et de nouveaux traitements pour lutter contre ces maladies.
Infection des voies respiratoire inférieures est des maladies transmissibles au plus meurtrier du monde et la cause la plus fréquente de décès dans les pays en développement1. Globalement, ces infections représentent plus de 3,2 millions de décès1. En outre, la pneumonie nosocomiale est parmi les formes les plus courantes et les plus meurtrières des soins de santé infections contractées et est causée par des agents pathogènes plus résistantes aux antibiotiques2,3. Le parcours typique d’acquisition de la pneumonie bactérienne pour les deux extra-hospitalière et pneumonie nosocomiale est l’aspiration oropharyngée contenu dans les alvéoles. Les modèles murins utilisés pour étudier ces maladies souvent utilisent inoculation intranasale4, déposer une grande partie des bactéries à l’extérieur du poumon, provoquant des complications hors cible et symptômes tels que la sinusite et les traumatismes physiques, qui sont incompatibles avec la maladie progression dans l’homme que les modèles ont été conçus pour émuler. Autres modèles peuvent utiliser des chambres d’inhalation et dispositifs de micromisting, qui avec plus de précision miment les pneumonies virales, fongiques et tuberculeuses, mais récapituler pas avec précision la voie normale d’acquisition pour les pneumonies bactériennes typiques.
Le modèle de pneumonie murine aspiration oropharyngée peut être utilisé pour simuler la voie naturelle et la pathogenèse de la pneumonie bactérienne. Par inoculation 50 µL de la suspension bactérienne dans l’oropharynx de souris anesthésiés à l’aide d’une pipette, aspiration réflexive s’ensuit, qui se traduit par une pneumonie infectieuse. En utilisant ce modèle, on peut examiner la pathogenèse des pathogènes qui causent la pneumonie et de nouveaux traitements pour lutter contre ces maladies avec un modèle de fidélité plus élevé, plus analogue aux infections de pneumonie d’aspiration observées chez l’homme. En outre, à la différence des modèles similaires qui infectent par l’intermédiaire de la cavité buccale5,6, ce modèle garantit que l’inoculum complet atteint les poumons au lieu de l’intestin, où il peut causer une inflammation hors site et infections, telles que la gastrite et l’entérite. Enfin, contrairement à un autre modèle publié qui nécessite un laryngoscope et inocule à travers la trachée7, ce modèle n’obstrue pas les voies respiratoires avec une aiguille de gavage et ne nécessite pas d’injection pour la livraison de l’inoculum. Au lieu de cela, l’inoculation s’appuie sur le réflexe d’aspiration naturelle de la souris.
Pour être sûr, souris ne sont pas les humains miniatures. Résultats obtenus à partir des modèles de souris doivent être pris en considération dans le contexte et interprétés par la suite pour l’applicabilité aux humains, basée sur les différences et les similitudes entre les deux espèces de6. Il est également important de choisir la souche de souris approprié comme certains sont plus sensibles à certaines infections que d’autres ; Il en va de même pour la souche pathogène de…
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par le National Institute of Allergy et des maladies infectieuses au National Institutes of Health [Grant Numbers R01 AI117211 AI130060 R01, R21 AI127954 et AI106375 R42 BS] et nous la Food and Drug Administration [du contrat HHSF223201710199C de BML].
Agar | BD | 214530 | Combine with TSB to make TSA |
Beads, Borosilicate Glass | Kimble | 135003 | Sterilize by baking or autoclaving before each use |
Beaker, 250 mL | Pyrex | 1003 | Used during precise aliquoting of concentrated bacterial inocula |
Centrifuge | Sorvall | ST 40R | Capable of 4,000×g at 4°C |
Chamber for Anesthesia | Kent Scientific Corporation | VetFlo-0720 | Accommodates up to 5 mice |
Cryomold, Intermediate Size | Sakura Tissue-Tek | 4566 | Disposable vinyl specimen molds, 15×15×5 mm |
Dental Floss | Oral-B | 37000469537 | Tie to stable post approx. 6" above table height |
Forceps | VWR | 82027-440 | Used to gently pull tongue out of mouse's mouth |
Homogenizer for Lung Tissue | Omni International | TM125-115 | Autoclave before first use; rinse between samples |
Isoflurane for Anesthesia | Abbott | 10015516 | Alternative drug can be used; modify procedure accordingly |
iSTAT Cartridge | Abbott | 03P79-25 | Various cartridges are available to suit your needs |
Ketamine, 100 mg/mL | Western Medical Supply | 4165 | Dilute 1:10 in PBS to 1 mg/mL and combine with Xylazine at 1 mg/mL |
Ointment for Eyes | Akorn | Tears Renewed | Avoid touching eye with tip of dispenser |
Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | Used to freeze lung samples at -80 °C to prepare for pathology sectioning |
Petri Dish | VWR | 25384-302 | Polystyrene, disposable, sterilized, 100×15 mm |
Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-031-CM | Dulbecco's PBS without calcium and magnesium |
Pipette Tips, 200-μL | VWR | 10017-044 | Autoclave before use |
Pipetter, 200-μL | Gilson | Pipetman P200 | Autoclave and calibrate before use |
Spreader, Bacterial Cell | Bel-Art | F377360006 | Sterilize by baking or autoclaving before each use |
Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter × 38.1 mm Length | VWR | 58948-150 | Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting |
Stir Plate, Magnetic | Corning | PC-620D | Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting |
Tryptic Soy Broth (TSB) | BD | 211822 | Combine with Agar to make TSA |
Vial, Conical, Sterile, 50 mL | Corning | 431720 | Used for preparing bacterial inocula |
Vial, Conical, Sterile, 500 mL | Corning | 431123 | Used to concentrate inocula for preparing frozen inocula |
Vial, Cryogenic, 2.0 mL | Corning | 430659 | Used for cryogenic storage of concentrated bacterial inocula |
Xylazine, 20 mg/mL | Akorn | AnaSed Injection | Dilute 1:20 in PBS to 1 mg/mL and combine with Ketamine at 1 mg/mL |