제 2 철 염화 유도 개 경 동맥 혈전 증: 혈관 손상의 큰 동물 모델

Summary

여기, 우리는 큰 동물 혈관 손상 모델에서 잘 특징이 고 일반적으로 사용 되 작은 동물 제 2 철 염화 유도 (FeCl₃) 경 동맥 상해 모델에 사용 하기 위해 필요한 수정 제시. 결과 모델은 예방 및 thrombolytic 약리 및 기계적 개입의 전 임상 시험 평가 위해 활용할 수 있습니다.

Abstract

대뇌 허 혈 성 뇌졸중 및 심근 경색 폐색 동맥 혈전 증 기여 ~ 13 백만 죽음에 매년 전세계적으로. 여기, 우리는 번역 작은 동물에서 혈관 상해 모델 큰 동물 (개), 예방 및 thrombolytic 요원의 사전 임상 심사에 사용할 수 있는 약간의 수정. 수정된 프로토콜 수술 방법 이외에 두뇌와 조직학 분석 경 동맥을 확인을 위해 경 동맥을 처리 하는 데 자세한 내용은 제품은에 의해 경 동맥 수로 화를 평가 하기 위해 단계별 메서드에 대해 설명 합니다. 수로 화와 대뇌 출혈, 자기 공명 영상 (MRI)을 이용 하 여 다운스트림 thromboembolic 사건의 평가 완료 하는 특정 매개 변수. 또한, 큰 동물 (개) 혈관 상해로 번역 하는 데 필요한 이전 확고 작은 동물 모델에서 특정 절차 변경 내용은 설명 합니다.

Introduction

뇌졸중 치료는 크게 개입 심혈 관 질환에 약물 치료와 혈관 내 수술 개입¹에 잘 반응 하기 때문에 주로 관상 동맥 질병 치료를 모방한. 그러나 이러한 치료,, 번역 되지 않았습니다 성공적으로 뇌를. 현재 뇌졸중 치료와 함께 어려움 그는 재조합 조직 플라스 미노 겐 활성 제 (rTPA) 되돌릴 수 없습니다, 있으며 관리 출혈 성 변환^2,3, 의 중요 한 6.4% 위험을 운반 ⁴. 작은, 종종 어려운 창⁵그것의 사용을 제한 하는 결과 병 적 상태와 사망률. 또한, restenosis 및 폐색 초기 thrombolysis, 초기 신경 개선 반전 후 종종 발생 합니다. 요약, 환자의 고통을 허 혈 성 뇌혈관 모욕의 rTPA 대다수 (~ 90%)를 제외 하는 관리할 좁은 시간 창이 있다.

정 맥 antiplatelet 치료의 역할은 향상 된 선박 recanalization, 생존 및 결과²허 혈 성 뇌졸중 치료에 약속을 보이고 있다. 불행히도, 이러한 약물 내 두개골 및 두개골 외 출혈의 예측 가능한 부작용, 주로 있기 때문에 방법에 적절 하 게 반전 또는 그들의 활동²를 제어. 혈소판을 방지에 효과적인, 반면 출혈과 그들의 활동을 반대 하는 무 능력의 위험 뇌졸중 환자 처리 루틴에서 사용을 배제 했습니다. 따라서, 필요, 혼자 또는 조합 방지 하 고 혈전을 lyse 아직 안전 프로필이 출혈 용납 제대로 뇌 같은 폐쇄, 낮은 볼륨 공간에서 사용 하면 강력한 지원을 약물에 대 한 존재 합니다.

동맥 혈전 증 및 재 협 착 증의 메커니즘을 이해 하 고 평가 thrombolytics 및 재 협 착을 방지 하는 약물 전 임상 약물 개발의 일환으로 소형 및 대형 동물 모델을 요구 한다. 제 2 철 염화 유도 혈관 상해 신속 하 고 정확 하 게 쥐, 쥐, 기니 피그의 노출된 혈관에 혈전의 형성을 유발 하는 널리 사용된 기법 이며 토끼^{6,,78, 9 , 10 , 11 , 12}. 유전자 조작 편의성, 저렴 한 동물 구입, 낮은 일당 주택 비용을 포함 한 여러 가지 이점을 제공 하는 이러한 작은 종. 불행히도, 작은 동물 실험 액세스 혈소판 반응성, 혈액 가스 분석 및 염증 반응에 수술 하는 동안 여러 피 무를 부정할. 더 중요 한 것은, 큰 동물을 훨씬 더 밀접 하 게 인간 혈소판 생리학^6,13모방. 혈전 증의 병 태 생리학의 연구, 새로운 항 혈소판 및 항 응고 약물의 유효성 검사 및 잠재적인 thrombolytics⁶ 의 발견 FeCl₃ 경 동맥 상해 모델 주된 역할을 담당해 왔습니다. ^{, 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12}. 이전 모델 생쥐, 쥐, 기니 피그, 토끼 용이성 및 유전자 조작에 대 한 유연성 제공 하지만 번역 전 임상 모델은 잠재적 치료제^{6의 환자 투약 및 독성 연구에 중요 한 ,13}. 비록 thrombotic 장애의 몇 가지 모델 생쥐, 말 초 혈관 질환에 적용 되는 혈전의 대형 동물 모델에서에서 개발 된 뇌졸중과 심근 경색 몇과 있습니다. 원숭이, 개, 돼지에 첫 번째 혈전 증 모델 협 착 증, 혈관, 순환 흐름 감소^14,,1516에 일반적으로 결과에 hemostats 및 나중 실린더 적용에 집중 했다. 제 2 철 염화 모델에서 내 피 손상의 사이트에서 폐색 혈전, 대신 이러한 모델에 혈전 주기적 혈전 증, 말 초 색전술 귀착되 고 정상 혈액 흐름을 반환 합니다. 비교에서는, 제 2 철 염화 모델 여기 큰 동물, 부상 사이트에서 폐색 혈전에 결과에서 수정 및 안정 이며 thrombolytic 치료 전에 혈관에 의해 확인. Diem와 개 그리고 적절 한 외과 전문의 구입, 우리가 세부 혈전 증 활용 수술, 이미징 및 조직학 연구 실험실 수 있도록 혈관 상해의 큰 개 모델 여기에 대 한 조사는 충분 한 자금을 제공 기술입니다.

Protocol

설명 된 조사 관리 및 건강의 국가 학회의 실험실 동물의 사용에 대 한 지침을 준수 하 고는 오하이오 주립 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (#2015A00000029)에 의해 승인 했다. 모든 수술 조작 했다 깊은 마 취하에 수행 하 고 동물 절차 동안 고통을 모든 단계에서 발생 하지 않았다. 설명 하는 모든 실험 비 복구 했다입니다. 1입니다. 준비 갓 제 2 철 염화 물 (FeCl3</su…

Representative Results

여기 자세한 절차를 수행 하는 것은 폐색 동맥 내정간섭의 예방 또는 thrombolytic 평가에 사용할 수 있는 모델 개발 귀 착될 것 이다. 전에, 하는 동안, 그리고 상용 소프트웨어에 의해 기록 된 치료 후 그림 1A 기준선 흐름 속도 결과 혈액 흐름 속도 보여줍니다. 이 녹음에서 데이터는 경 동맥 상해와이 개 모델에서 치료 재 관류의 비율을 결정 하기 위해 …

Discussion

FeCl₃ 유도 혈관 상해 모델 작은 동물에서 혈전 증 연구에 널리 이용 되 고 다양 한 장점 가진 큰 동물, 전 임상 모델을 변환 하기 쉽습니다. 한 개에는 프로토콜에 맞게 약간의 수정을 허용 약리학 내정간섭 및 선박 수로 화 하기 전에, 평가 제품은 후 뇌졸중과 출혈 볼륨을 평가 하 두 자기 공명 영상 활용 중, 고 후 치료. 다른 thrombotic 큰 동물 모델 부상의 사이트에서 안정화 폐색 혈전을 공?…

Materials

1/8” umbilical tape	Jorgensen Laboratories Inc.,	#J0025UA	for ferric chloride application
4% paraformaldehyde in PBS	Alfa Aesar	AAJ61899AP
10% neutral buffered formalin	Richard-Allan Scientific	5701
2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4)	Sigma Aldrich	T8877
ADP/Collagen cartridges	Siemens Diagnostics	B417021A
4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer	Becton Dickinson	BD 369714
4.5 ml lithium heparin vacutainer	Becton Dickinson	BD 368056
EDTA K3 vacutainers	Becton Dickinson	BD455036
Doppler flow probe	Transonic Systems Inc	MA2.5PSL
Hematoxylin 560	Surgipath	3801570
Eosin	Surgipath	3801602
LabChart Software	ADInstruments Inc.
Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet	Siemen's Diagnostics
Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe)	NovaPlus	402525D
HUG-U-VAC positioning system	DRE Veterinary	1320