Un modèle murine de la dengue virus induite par l'encéphalite virale aigue comme la maladie
Summary
Ici, nous présentons un protocole pour créer un modèle murine immunocompétent d’IC (Institut de recherche sur le cancer) de l’infection de système nerveux central pour montrer le développement de la neuropathie. La surveillance des désordres encéphalitiques virales aigues par des scores identiques de maladie pourrait être exécutée pour montrer la neuropathie virus-induite de dengue in vivo.
Abstract
Le virus de la dengue (DENV), un virus transmis par les arthropodes transmis par les moustiques, peut causer la maladie grave connue sous le nom de dengue hémorragique, qui se caractérise par des complications mortelles dues à des fuites de plasma, ascites, effusion pleurale, détresse respiratoire, saignements graves et une déficience des organes. Quelques cas d’infection de DENV présentent des manifestations neurologiques ; cependant, les études n’ont pas exploré la neuropathogenèse DENV-induite plus loin. Dans cette étude, nous présentons un protocole pour employer une souris d’IC (Institut de recherche sur le cancer) de surcapacité immunocompétente pour étudier l’induction de l’infection de système nerveux central (CNS) avec DENV, suivie de la progression de l’encéphalite virale aigue-comme maladie.
Introduction
DENV, un virus transmis par les arthropodes de la famille des Flaviviridae, contient un génome d’ARN à sens positif qui code trois protéines structurelles virales (capsid, prémembrane et enveloppe) et sept protéines virales non structurelles (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B , et NS5). Les quatre sérotypes de DENV (DENV1-4), qui infectent environ 390 millions de personnes par an, causent un fardeau mondial, même si les gouvernements ont orienté des efforts substantiels vers les moustiques vecteurs et la lutte contre les maladies1. À l’heure actuelle, des vaccins protecteurs et des médicaments antiviraux thérapeutiques sont en cours de développement et nécessitent une validation à long terme2. En pratique clinique, bien qu’un patient de dengue avec l’infection de CNSsoit rare, il doit être davantage exploré pour comprendre la diversité du développement de la dengue 3. Une enquête et une validation plus poussées sont nécessaires; notamment, l’Organisation mondiale de la Santé (OMS) a inclus la participation de l’affaiblissement du SNC, tels que les troubles cognitifs, les convulsions, l’encéphalopathie et l’encéphalite, dans la classification de la dengue sévère3,4. La construction de modèles animaux d’infection par le DENV est indispensable pour explorer la neuropathogenèse de l’infection à DENV.
Pour générer l’infection par DENV de CNS, plusieurs études ont exécuté différents itinéraires de l’infection de DENV, y compris (1) l’inoculation intracérébrale des souris de C57BL/6 qui ont reçu 4 x 103 unités de plaque-formation (PFU) de DENV3nonadapté, 6, (2) inoculation intrapéritonéale des souris BALB/c qui ont reçu 7 x 104 PFU de DENV4 neuroadapté in vitro7, (3) inoculation intracérébrale de souris suisses qui ont reçu 1 x 105 PFU de vivo neuroadapté DENV18, et (4) co-inoculation intracérébrale et intrapéritonéale des souris allaitantes iCR qui ont reçu 1 x 106 PFU de DENV2 non adapté9. Selon les résultats de ces études5,6,7,8,9, infection DENV chez les souris entraîner une réplication virale dans le cerveau, conduisant à des Syndromes d’encéphalite-comme, changements comportementaux accompagnés de la paralysie de membre et de l’instabilité posturale, neurotoxicité et inflammation de CNS, fuite générale et localisée de plasma par la barrière hémato-encéphalique (BBB), et létalité. Tous les résultats de ces études5,6,7,8,9 ont montré la capacité du DENV à infecter le SNC et l’induction d’une encéphalite virale aigue maladie à la suite d’une infection.
Sur la base de nos résultats actuels9,10,11,12,13,14,15, nous avons créé un modèle murine de l’infection DENV comme un in vivo plate-forme pour examiner l’efficacité thérapeutique des agents/facteurs ciblés contre la réplication virale, aussi bien que la neurotoxicité. Ici, nous rapportons le protocole utilisé pour créer une souris iCR hors-sang immunocompétente pour étudier l’infection de CNS et pour surveiller le développement des neuropathies avec différentes severities provoquées par DENV. Les résultats montrent la progression significative de la maladie encéphalite-comme chez les souris deDENV-infectées d’une manière dépendante du temps.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’infection de DENV a été détectée dansle CNS des patients graves de dengue 3,17,suggérant la possibilité de la manifestation de l’encéphalite virale aigue s’est produite pendant la pathogénie de dengue. Ici, nous rapportons un modèle murine in vivo de l’infection de DENV pour étudier la participation du dysfonctionnement de CNS dans la dengue grave, particulièrement avec un foyer sur DENV-induite maladies virales-comme. Par rapport aux modèles préc?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été soutenue par des subventions du Ministère des sciences et de la technologie (MOST107-2321-B-038-001) et du financement intra-muros 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwan.
Materials
| Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI) | Gibco | 11875-085 | Diluting virus |
| 0.3-mL Insulin Syringe | BD Ultra-FineII | 328838 | Intracerebral and intraperitoneal injection |
| Microbalance | METTLER TOLEDO's LabX | AL104 | Weight mouse |
| Non-adapted DENV2 (strain PL046) | The Centers for Disease Control of Taiwan | – | Infect mouse |
| Institute of Cancer Research (ICR) suckling mouse | BioLASCO Taiwan Co., Ltd | – | Our murine model |
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