Summary

Een in vivo oestrogeen deficiëntie muis model voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze

Published: August 13, 2019
doi:

Summary

Klinisch, oestrogeen deficiëntie bij menopauzale vrouwen kunnen verergeren de incidentie van lipide verstoring en atherosclerose. We vestigden een in vivo oestrogeen deficiëntie model door bilaterale ovariëctomie via een dubbele Dorsale-laterale incisie in apoE-/- muizen. Het muismodel is van toepassing voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze.

Abstract

Postmenopauzale vrouwen lopen een groter risico op het ontwikkelen van cardiovasculaire aandoeningen dan premenopauzale vrouwen. Vrouwelijke muizen ovariectomized (OVX) bij spening display verhoogde atherosclerotische laesies in de aorta in vergelijking met vrouwelijke muizen met intact ovariële functie. Echter, laboratorium modellen waarbij oestrogeen-deficiënte muizen met atherosclerose-gevoelige status ontbreken. Dit tekort is van cruciaal belang omdat klinische oestrogeen deficiëntie bij menopauzale vrouwen de incidentie van reeds bestaande of voortdurende lipide verstoring en atherosclerose kan verergeren. In deze studie, we vestigen een in vivo oestrogeen-deficiënte muismodel door bilaterale ovariëctomie via een dubbele Dorsale-laterale incisie in apolipoproteïne E (ApoE)-/- muizen. Vervolgens vergelijken we de effecten van 17β-estradiol en pseudoprotodioscin (PPD) (een fyto-oestrogeen), oraal toegediend via hazelnoot verspreiding. We vinden dat hoewel PPD enige invloed uitoefent op het verminderen van het eindgewicht en plasma TG in OVX apoE-/- muizen, het anti-atherosclerotische en cardiale beschermende capaciteiten heeft die vergelijkbaar zijn met zijn tegenhanger van 17β-estradiol. PPD is een fyto-oestrogenen die is gemeld dat anti-tumor eigenschappen uit te oefenen. De voorgestelde methode is dus van toepassing op het screenen van fyto-oestrogenen via perorale toediening ter vervanging van traditionele hormonale substitutietherapie bij postmenopauzale vrouwen, waarvan is gemeld dat zij potentieel schadelijke tumorigenetische Capaciteit. Perorale toediening via hazelnootpasta is niet-invasief, waardoor het algemeen toepasbaar is op veel patiënten. Dit artikel bevat stapsgewijze demonstraties van bilaterale ovariëctomie via de dubbele Dorsale-laterale incisie in apoE-/- muizen en peroral 17β-estradiol of fyto-oestrogeen hormoon vervanging via hazelnoot verspreiding. Plasma lipide en cardiovasculaire functie analyses met behulp van echocardiografie volgen.

Introduction

Epidemiologische en klinische studies hebben aangetoond dat postmenopauzale vrouwen een aanzienlijk groter risico op hart-en vaatziekten hebben dan premenopauzale vrouwen1,2. Hormonale substitutietherapie (HRT) kan het relatieve risico van hart-en vaatziekten te verminderen 0,37-0.793. Onder andere complicaties, atherosclerose veroorzaakt door hart-en vaatziekten is de belangrijkste doodsoorzaak wereldwijd4. Echter, laboratorium modellen waarbij oestrogeen deficiënte muizen presenteren atherosclerose gevoelige status ontbreken. Dit protocol biedt een in vivo oestrogeen deficiëntie muismodel voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze.

Eerdere studies tonen aan dat de toepassing van ovx in atherosclerotische knaagdieren gevoed met een hoog-cholesterol dieet postmenopauzale vrouwen die lijden aan atherosclerose5,6,7,8kan nabootsen. Een reproduceerbare en handige diermodel lijkt op de atherosclerotische toestand bij menopauzale vrouwen is de basis van exogene oestrogeen onderzoek. Hier werd een dubbele Dorsale-laterale incisie van bilaterale ovariëctomie toegepast bij atherosclerose-gevoelige apolipoproteïne E Knockout (ApoE-/-) muizen9,10. Vergeleken met middelste buik-of dorsale incisie, is dubbele Dorsale-laterale incisie een eenvoudigere, minder tijdrovende methode die ernstige hechting en ontsteking van de buikholte kan voorkomen. Perorale toediening via hazelnoot verspreiding (Zie tabel van de materialen) is niet-invasief en handig, waardoor het algemeen toepasbaar als een lange termijn administratie modus11. Slow-release pellet implantatie is ook populair6. Implantaten verergeren echter de incidentie van infectie, vooral bij muizen die onderworpen zijn aan OVX. Andere niet-invasieve toedieningswijzen, zoals mond sonde en waterbeheer, hebben ook veel nadelen. Orale maagsonde stress meestal muizen en kan veroorzaken oesofageale letsel. Het hormoon toedienen via drinkwater is zeer gunstig; echter, de toevoeging van DMSO als een emulgator is onvermijdelijk als exogene oestrogenen zijn onoplosbaar in water. Hier kozen we voor peroral 17β-estradiol of fyto-oestrogenen hormoon vervanging via hazelnoot verspreiding voor langdurige toediening.

Onlangs is het gunstige effect van HRT op het cardiovasculaire systeem van postmenopauzale vrouwen betwist in het vrouwen gezondheidinitiatief (WHI) Trials12. Aan de ene kant, exogene oestrogeen alleen oefent een gunstig effect op het cardiovasculaire systeem; aan de andere kant, het kan combineren met metohydroxyprogesteron acetaat te verhogen het risico van cardiovasculaire gebeurtenissen. Serieuzer, HRT kan leiden tot borst-en baarmoeder tumorprogressie, en dit effect heeft aanzienlijk beperkt het gebruik13,14. Meer belangstelling is gericht op de cardiovasculaire-beschermende effecten van exogene oestrogenen ontbreekt mitotische activiteit in tumorcellen15,16,17. Meerdere studies bij mens en dier suggereren dat fyto-oestrogenen met structuren die vergelijkbaar zijn met die van oestrogeen een gunstige rol in cardiovasculaire bescherming kunnen spelen15,18.

Dus, de doelstellingen van het huidige werk zijn (i) om een in vivo oestrogeen deficiëntie muismodel te bouwen door bilaterale ovariëctomie via een dubbele Dorsale-laterale incisie in apoE-/- muizen en (II) om de cardiovasculaire beschermende effecten van peroraal te vergelijken toegediend 17β-estradiol en pseudoprotodioscin (PPD), via hazelnoot verspreiding. 17β-estradiol is een soort exogene oestrogeen dat behoort tot vrouwelijke seksuele hormonen6,11,19. PPD, een steroïde saponine en fyto-oestrogenen van Dioscorea planten, is eerder gemeld om uit te oefenen anti-tumor eigenschappen20.

Protocol

Alle Dierenzorg-en experimentele protocollen werden goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité van de Chinese Academie voor medische wetenschappen en Peking Union Medical College (machtigings nummer: SYXK (Peking) 2013-0023). De oorsprong van ApoE-/- muizen is C57BL/6j9,10. 1. bilaterale Ovariëctomie via een dubbele Dorsale-laterale incisie in apoE-/- muizen Bij het spenen (leeft…

Representative Results

Een typische experimentele behandelings regeling, zoals gebruikt in deze studie, wordt geïllustreerd in Figuur 1. Bij het spenen (leeftijd 28 dagen), vrouwelijke apoE-/- C57BL/6j muizen werden verdoeiliseerd withavertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneally). Muizen waren bilateraal OVX of Sham bediend door middel van een 1 cm dorsale incisie. Een week na bilaterale OVX, de muizen werden gevoed een hoog-cholesterol dieet (1,25% cholestero…

Discussion

De hier beschreven methodologie is een muismodel dat lijkt op lipide verstoring en atherosclerose gezien bij menopauzale vrouwen. Het is goed gedocumenteerd dat oestrogeen deficiëntie bij postmenopauzale vrouwen kan verergeren de incidentie van reeds bestaande of lopende hypercholesterolemie met progressief complexe en wijdverbreide atherosclerostic laesies1. Om na te bootsen de atherosclerose-gevoelige status in kliniek, ApoE-deficiënte muizen, een reproduceerbare en handige bron van dieren waa…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (81202526 tot J.X.), de National Natural Science Foundation of China (81302769 tot B.S.), de Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 tot B.S.), de Chinese postdoctorale Science Foundation (20110490325 tot J.X.), en de Ph.D. Programma’s Stichting van het ministerie van onderwijs van China (20121106120031 tot B.S.).

Materials

17β-estradiol, >98% Sigma-Aldrich E8875-250MG Estrogen
Disposable syringes (with 25G needles) Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd 0.5*19TWLB Cardiac bleeding
High-cholesterol mouse diet Huafukang Bio-Technology N/A 1.25% cholesterol, 0% cholate
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System VisualSonics Vevo®770 Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction
2-Methyl-2-butanol Sigma-Aldrich 152463-250ML Preparation of avertin
Micro Dissecting forceps, Curved 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting forceps, Straight 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd R413 Suture and ligation of the tissues
Nut cream (Nutella) Ferrero N/A Medium for peroral 17β-estradiol or PPD
OptiVisor optical glass binocular magnifier Dohegan Optical Company Inc. N/A Assistant of identifying the tissues during ovariectomy
Phosphate-buffered saline at pH 7.4 SIGMA P3813 Preparing 1 L saline
Pro MultiLabel Microplate Reader Tecan Infinite M1000 Plasma TC and TG determination
Pseudoprotodioscin Shanghai Winherb Medical S & T Development W-0427 CAS registry no. 102115-79-7
Rimadyl, 50 mg/mL Pfizer Pharma GmbH 462986 Postoperative analgesia after ovariectomy
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547-1L Dissolving the 17β-estradiol or PPD
Solcoseryl Eye-Gel Menarini, Solco Basle Ltd. Eye protection during anesthesia
Stereo microscope MCALON MCL-6STV Image of the intimal region of aorta
Table model high speed centrifuge SIGMA 1-14K Preparation of plasma
Scissors, slight Curve (14cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Scissors, straight Flat (14cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tribromoethanol Sigma-Aldrich T48402-5G Preparation of avertin
Triglycerides (TG) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A110-1 Plasma TG determination
Total cholesterols (TC) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A111-1 Plasma TC determination

References

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).
  2. Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).
  3. Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26 (6), 1403-1410 (1995).
  4. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420 (6917), 868-874 (2002).
  5. Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).
  6. Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).
  7. Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).
  8. Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).
  9. Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258 (5081), 468-471 (1992).
  10. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).
  11. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).
  12. Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women’s Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).
  13. Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).
  14. Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).
  15. Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).
  16. Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).
  17. Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).
  18. Guivarc’h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).
  19. Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).
  20. Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).
  21. Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).
  22. Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).
  23. Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).
  24. Keaney, J. F., et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).
  25. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).
  26. Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).
  27. Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).
  28. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).
  29. Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).
  30. Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).
  31. Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).

Play Video

Cite This Article
Sun, B., Yin, Y., Xiao, J. An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause. J. Vis. Exp. (150), e59536, doi:10.3791/59536 (2019).

View Video