血管形成術治療患者における局所循環単核前駆細胞を用いた切断の予測

Summary

下肢切断は、重篤な四肢虚血(CLI)における閉塞血管形成術の後でも起こり得る。単核前駆細胞(Mpc)は血管修復を反映する。本プロトコルは、血管形成術に近い循環からのPPCの定量化、および内皮機能不全との関係および下肢切断の予測を記述する。

Abstract

重篤な四肢虚血(CLI)は末梢動脈疾患の進行期を表す。血管形成術は下肢への血流を改善する;しかし、一部の患者は不可逆的に四肢切断に進行する。血管損傷の程度および血管修復のメカニズムは、血管形成術後の結果に影響を与える因子である。単核前駆細胞(Mpc)は血管損傷および修復に反応し、血管疾患を反映する能力を有する。本プロトコルは、血管形成部位に近い血管からの血液循環から得られたMpCの定量化、ならびに血管形成障害との関係およびCLI患者における血管形成術後30日間における四肢切断の予測能力を記述する。

Introduction

末梢動脈疾患(PAD)は、血液供給の制限を伴う慢性および進行性の血管閉塞を特徴とする^1。世界規模では、下肢のPADは高齢者人口の約10%に影響を及ぼし、その最大7%は四肢切断^2、3に提出される。

クリティカルリム虚血(CLI)はPAD¹の最も深刻なプレゼンテーションを表します。患者は通常、閉塞した動脈に起因する安静時、潰瘍、または壊疽で痛みを経験する。臨床予後は好ましくない一方で、1年³年^、4、5の間に四肢切断と死亡の30%のリスクによってマークされています。

血管形成術は、CLI患者の下肢への血流を回復させることができる低侵襲血管内処置である。しかし、血管形成術^1,5の後でも、一部の患者は必然的に大きな四肢切断を必要^とする。血管形成術後の不利な結果の早期同定は、治療執行の可能性のために非常に貴重である。

従来の危険因子は、血管形成術⁶を受けるCLI患者における主要な四肢切断に対して限られた予測能力を提供するかもしれない。病態生理性バイオマーカーは、潜在的な臨床応用を有する新規の方法を表し、血管損傷に関連する疾患に特に有用な^{結果をもたらす可能性がある7。}今日では、内皮修復特性を所有する細胞集団の参加は、アテローム硬化性プラークの部位において^、8,9に^{ますます認められている}。

単核前駆細胞(MPC)は、血管再生能力を有する幹細胞の骨髄および独自の構造的および機能的特性に由来する。増殖するMPCの能力のために、移行し、血管の遵守を示す;これらの細胞は虚血^10、11、12に応答して内皮修復を反映する良い候補となっている。また、血管損傷の根底にあるメカニズムへの継続的な関心は、局所的に生じるバイオマーカーの予後的役割を探求する動機^{となっている。}

本研究の目的は、血管形成術を受けているCLI患者の血管閉塞に近い循環するPPCの量を決定する方法を説明することです。内皮機能不全と四肢切断の指標を持つMpC間の関係を評価する方法。

併存症と固有の血管特徴に基づく予後と比較して、局所的なPPCの量は、内皮機能不全および四肢切断に関する臨床結果を予測する特定の能力を示す。一貫して、いくつかの研究は、PAD^15、16を有する患者の評価中に同様のバイオマーカーの予後の役割^を説明^している。

前の結果⁷に基づいて、ここで説明する方法は、下肢および冠動脈虚血、脳卒中、血管炎、静脈血栓症および血管損傷および修復を伴う他の人々のようないくつかの臨床において、不利な血管転帰の危険性がある集団の早期同定に有用であり得る。

Protocol

セントロ・メディコ・ナシオナル「20デ・ノビエンブレ」ISSSTEの機関研究倫理委員会は、この将来のプロトコルを承認し、登録されたすべての患者が書面によるインフォームド・コンセントを提供しました。 1. 下肢の血管ブロック、血液採取、バルーン血管形成術の評価 注:この実験に使用された研究サンプルは、68歳と20人中10人の20人の糖尿病患者で…

Representative Results

閉塞した動脈からの血液サンプルは、血管形成術に対処した部位で、68歳と20人中10人の糖尿病患者から採取された。サンプル人口の半数は喫煙者であった。血管病変は主にラザフォード級VIとして採点された。一方、患者は2型糖尿病(100%)の有病率が高く、高血圧(70%)が高いと脂質異常症 (55%) 下肢血管形成術が行われた後の30日間の臨床フォローアップ。血管形成術後のベ?…

Discussion

血管ブロックの正確な部位での採血は技術的な困難を示す可能性があります。したがって、血管ブロックに近接して採血を行った。同様に、血管プラークに近いPPCの量は非常に動的であり、血管形成術の前後にバリエーションを生じる可能性があります。我々の観察によると、血管損傷および修復内で起こるいくつかの病因生理学的プロセスを反映する可能性があるため、MPCの数のベースラ?…

Materials

BSA	Roche	10735086001	Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005%
Improved Neubauer	Without brand	Without catalog number	Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes	BD Vacutainer	#367863	Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde	SIGMA-ALDRICH	#SZBF0920V	Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes	KIMBLE CHASE	45060 13100	Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm