Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.
Diyabetik retinopati, retinal damarların veya arterlerin tıkanması ve oküler iskemik sendrom gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine yol açabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için ilgili deneysel modellerin geliştirilmesi gerekir. Anatomik olarak, ana retina kan sağlayan bir damar oftalmik arterdir (OpA) ve OpA yaygın karotis arterin (CCA) iç karotis arterinden kaynaklanır. Bu nedenle, CCA’nın bozulması etkili bir şekilde retina iskemisi neden olabilir. Burada, sağ CCA’yı 6-0 ipek dikişlerle bağlamak ve sol CCA’yı bir kelepçe ile 2 saniye boyunca geçici olarak tıkamak için geçici bilateral ortak karotis arter tıkanıklığı (tBCCAO) ile retina iskemisinin bir fare modelini kurduk ve tBCCAO’nun retina disfonksiyonuna yol açan akut retina iskemisine neden olabileceğini gösterdik. Mevcut yöntem, sadece cerrahi iğneler ve bir kelepçe kullanarak cerrahi aletlere olan güveni azaltır, genellikle orta serebral arter tıkanıklığının fare modellerinde görülen beklenmedik hayvan ölümünü en aza indirmek için tıkanma süresini kısaltır ve yaygın retina iskemik bulgularının tekrarlanabilirliğini korur. Model, farelerde iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak için kullanılabilir ve in vivo ilaç taraması için daha fazla kullanılabilir.
Retina görme fonksiyonu için nörosensör bir dokudur. Görme fonksiyonu için önemli miktarda oksijen gerektiğinden, retina vücuttaki en yüksek oksijen talep eden dokulardan biri olarak bilinir1. Oksijen kan damarlarından iletilirken retina damar hastalıklarına karşı hassastır. Diyabetik retinopati ve retinal kan damarı (damarlar veya arterler) tıkanıklığı gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine neden olabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için retina iskemisinin tekrarlanabilir ve klinik olarak ilgili deneysel modelleri gerekli kabul edilir. Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) intralüminal filament takılarak deneysel serebral iskemi2,3in vivo kemirgen modellerinin geliştirilmesi için en genel olarak kullanılan yöntemdir. Oftalmik arterin (OpA) MCA’ya yakınlığı nedeniyle, MCAO modelleri retina iskemisinin patofizyolojisini anlamak için aynı anda da kullanılır4,5,6. Retina iskemisi ile birlikte serebral iskemiyi teşvik etmek için, uzun filamentler tipik olarak ortak karotis arterin (CCA) veya dış karotid arterin (ECA) kesisi yoluyla yerleştirilir. Bu yöntemlerin yapılması zordur, ameliyatı tamamlamak için uzun bir süre gerektirir (bir fare için 60 dakikadan fazla) ve ameliyattan sonraki sonuçlarda yüksek farklılıklara yol açar7. Bu endişeleri iyileştirmek için daha iyi bir model geliştirmek önemli olmaya devam ediyor.
Bu çalışmada, farelerde retina iskemisini indük etmek için iğneler ve bir kelepçe ile kısa geçici bilateral CCA tıkanıklığı (tBCCAO) kullandık ve retinadaki iskemik yaralanmaların tipik sonuçlarını analiz ettik. Bu videoda, tBCCAO prosedürünün bir gösterisini vereceğiz.
Çalışmada, tBCCAO’nun basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak retina iskemisini ve eşlik eden retina disfonksiyonu indükleyebileceğini gösterdik. Ayrıca, retina iskemisinin bir fare modelinin geliştirilmesi için mevcut protokolümüzü gösterdik retina iskemisinin geliştirilmesi için önceki protokollere kıyasla daha kolay ve hızlıdır retinal iskemik yaralanma modelleri2,3,7.
Anato…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma, Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı’ndan (MEXT) Grant-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (Toshihide Kurihara’ya 18K09424 ve Yukihiro Miwa’ya 20K18393) tarafından desteklendi.
Atipamezole hydrochloride | Zenoaq | Antisedan | For anti-anesthesia |
Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems | – | For qPCR |
Butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | For anesthesia |
BZ-II Analyzer | KEYENCE | – | For an image merge |
BALB/cAJc1 | CLEA | – | Mouse strain |
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb | CST | 3700 | For western blot |
Clamp Forcep | World Precision Instruments | WPI 500451 | For surgery |
Dumont forceps #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | For surgery |
DAPI solution | Dojindo | 340-07971 | For IHC |
Envisu SD-OCT system | Leica | R4310 | For OCT |
FITC-dextran | Merk | FD2000S | For retinal blood perfusion |
Fluorescence microscope | KEYENCE | BZ-9000 | For fluorescence detection |
Gatifloxacin hydrate | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | For anti-bacterial infection |
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | For IHC |
Heating pad | Marukan | RH-200 | For surgery |
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | For western blot |
ImageQuant LAS 4000 mini | GE Healthcare | – | For chemiluminescence |
Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ | For anesthesia |
Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura | – | For sectioning |
Medetomidine | Orion Corporation | Domitor | For anesthesia |
Needle holder | Handaya | HS-2307 | For surgery |
PuREC | MAYO Corporation | – | For ERG |
Scissor | Fine Science Tools | 91460-11 | For surgery |
Sodium hyaluronate | Santen Pharmaceutical | Hyalein | For eye lubrication |
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | For mydriasis |
6-0 silk suture | Natsume | E12-60N2 | For surgery |