JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
自动翻译
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
神经科学

כתמים, הדמיה וניתוח של פטריות, בלוטות טעם של הרכבה מלאה, מקיפים וחיך

Published: February 11, 2021
doi:
10.3791/62126
,
1Anatomical Sciences and Neurobiology,University of Louisville

Summary

מאמר זה מתאר שיטות להכנת רקמות, כתמים וניתוח של פטריות שלמות, בלוטות טעם וחך המניבות בעקביות בלוטות טעם שלמות ושלמות (כולל סיבי העצבים המעוררים אותן) ושומרות על היחסים בין מבנים בתוך בלוטות הטעם לבין הפפילה שמסביב.

Abstract

בלוטות טעם הן אוספים של תאים ממחלים טעם המתמחים לזהות תת קבוצות של גירויים כימיים בחלל הפה. תאים אלה transducing לתקשר עם סיבי עצב הנושאים את המידע הזה למוח. מכיוון שתאים מעבירי טעם מתים ללא הרף ומוחלפים לאורך כל הבגרות, סביבת בלוטות הטעם מורכבת ודינמית, ודורשת ניתוחים מפורטים של סוגי התאים שלה, מיקומם וכל מערכת היחסים הפיזית ביניהם. ניתוחים מפורטים הוגבלו על ידי הטרוגניות וצפיפות רקמת לשון שהפחיתו באופן משמעותי את חמיכות הנוגדנים. מכשולים אלה דורשים פרוטוקולי חתך שגורמים לפיצול בלוטות הטעם על-פני מקטעים כך שהמדידות משוערות בלבד, וקשרי תאים הולכים לאיבוד. כדי להתגבר על אתגרים אלה, השיטות המתוארות בזאת כוללות איסוף, הדמיה וניתוח בלוטות טעם שלמות וארבורים סופניים בודדים משלושה אזורי טעם: פפילה פטרייתית, פפילות היקפיות והחך. איסוף בלוטות טעם שלמות מפחית הטיה ושונות טכנית וניתן להשתמש בו כדי לדווח על מספרים מוחלטים עבור תכונות כולל נפח בלוטות טעם, פנימיות בלוטות טעם כוללת, ספירת תאים transducing, ואת המורפולוגיה של arbors מסוף בודדים. כדי להדגים את היתרונות של שיטה זו, מאמר זה מספק השוואות של בלוטות טעם וכרכים פנימיים בין פטריות ולהקיף בלוטות טעם באמצעות סמן טעם כללי תווית לכל סיבי הטעם. זרימת עבודה לשימוש בתיוג גנטי של תאים דלילים של נוירוני טעם (עם תת-קבוצות מסומנות של תאים ממחלים טעם) מסופקת גם כן. זרימת עבודה זו מנתחת את המבנים של ארבורים בודדים של עצב הטעם, מספרי סוג התאים ואת היחסים הפיזיים בין תאים באמצעות תוכנת ניתוח תמונה. יחד, זרימות עבודה אלה מספקות גישה חדשנית להכנת רקמות וניתוח של בלוטות הטעם המלאות והמורפולוגיה המלאה של הארבורים הפנימיים שלהם.

Introduction

בלוטות הטעם הן אוספים של 50-100 תאי כינוי מיוחדים הקושרים תת-קבוצות של גירויים בעלי טעם כימי הנמצאים בחלל הפה. תאים טרנס-טרנסדוקציה טעם נחשבים בדרך כלל קיימים כמו סוגים1,2,3,4,5,6,7,8,9, בתחילה מבוסס על קריטריוני מיקרוסקופיה אלקטרונים שהיו מאוחר יותר בקורלציה עם סמנים מולקולריים. תאים מסוג II מבטאים פוספוליפאז C-beta 2 (PLCβ2)2 ואת קולטן חולף פוטנציאל cation ערוץ, חבר M subfamily 51 וכוללים תאים המתמרנים מתוק, מר, umami1,10. תאי סוג III מבטאים אנהידריז קרבוני 4 (Car4)11 וחלבון הקשור סינפטוזומלי 258 ומצביעים על תאים שמגיבים בעיקר לטעם חמוץ11. התאים המעבירים מליחות לא היו מתווים בבירור12,13,14, אך עשויים לכלול תאים מסוג I, סוג II וסוג III15,16,17,18,19. סביבת בלוטות הטעם מורכבת ודינמית, בהתחשב בכך שתאים ממחליפו טעם מתהפכות ברציפות לאורך כל הבגרות ומוחלפות באבות הבסיסיים3,20,21. תאים אלה מעבירי טעם מתחברים לסיבי עצב פסאודו-חד-קוטביים מהגרעיקים הגנניים והפטרוסאליים, המעבירים מידע טעם לגזע המוח. נוירונים אלה סווגו בעיקר על סמך סוג של מידע טעם שהם נושאים22,23 כי מידע על המורפולוגיה שלהם היה חמקמק עד לאחרונה24. תאים מסוג II מתקשרים עם סיבי עצב באמצעות חלבון אפנון הסידן הומאוסטזיס 1 ערוצי יונים25, ואילו תאים מסוג III מתקשרים באמצעות סינפסות קלאסיות8,26. אפיון נוסף של תאי בלוטות הטעם – כולל טרנסולציה של שושלות סוג התא, גורמים המשפיעים על הבידול שלהם, ואת המבנים של חיבור arbors הם כל תחומי החקירה הפעילה.

מחקרי בלוטות טעם הופרעו על ידי מספר אתגרים טכניים. הרקמות ההטרוגניות והצפופות המרכיבות את הלשון מפחיתות באופן משמעותי את חמידות הנוגדנים לאימונוהיסטוכימיה27,28,29. מכשולים אלה חייבו פרוטוקולי חלוקה המביאים לפיצול בלוטות הטעם על פני מקטעים, כך שהמדידות משוערות על סמך מקטעים מייצגים או מסתכמות על-פני מקטעים. בעבר, נעשה שימוש במקטעים דקים מייצגים כדי להעריך הן ערכי אמצעי אחסון והן את ספירת התאים של התמתן30. חתך סדרתי עבה יותר מאפשר הדמיה של כל מקטעי בלוטות הטעם וסיכום המדידות מכל סעיף31. חיתוך קטעים עבים כאלה ובחירת רק בלוטות טעם שלם הטיות דגימה לכיוון בלוטות טעם קטנות יותר32,33,34. הערכות פנימיות עצביות מבלוטות טעם חלקיות התבססו על ניתוחים של מספרי פיקסלים13,35, אם כימותו בכלל36,37,38. מדידות אלה מתעלמות לחלוטין מהמבנה ומספר הארבורים העצביים הבודדים, מכיוון שארבורים מפוצלים (ובדרך כלל מסומנים בצורה גרועה). לבסוף, למרות קילוף האפיתל מאפשר בלוטות טעם שלמות להיות מוכתם39,40, זה גם מסיר סיבי עצב בלוטות טעם ועלול לשבש את היחסים הרגילים בין תאים. לכן, חקירות של היחסים המבניים בתוך בלוטות הטעם הוגבלו בגלל הפרעה זו הנגרמת על ידי גישות מכתימות.

אוסף מבנה שלם מבטל את הצורך בסעיפים מייצגים ומאפשר קביעת מדידות בעלות ערך מוחלט של אמצעי אחסון, ספירת תאים ומורפולוגיות מבנה41. גישה זו גם מגבירה את הדיוק, מגבילה הטיה ומפחיתה את השונות הטכנית. אלמנט אחרון זה חשוב מכיוון שבלוטות הטעם מראות שונות ביולוגית ניכרת הן בתוך34,42 והן על פני אזורים43,44, וניתוחים שלם של בלוטות הטעם מאפשרים להשוות מספרי תאים מוחלטים בין תנאי שליטה וניסיוניים. יתר על כן, היכולת לאסוף בלוטות טעם שלמות מאפשרת ניתוח של היחסים הפיזיים בין תאים שונים transducing וסיבי העצב הקשורים שלהם. מכיוון שתאים מעבירי טעם עשויים לתקשר זה עם זה45 ולתקשר עם סיבי עצב46, יחסים אלה חשובים לתפקוד תקין. לפיכך, תנאי אובדן תפקוד לא יכול להיות עקב אובדן תאים, אלא שינויים ביחסי תאים. כאן יש שיטה לאיסוף בלוטות טעם שלמות כדי להשיג את היתרונות של מדידות מוחלטות עבור ניתוחי נפח זיקוק עבור בלוטות הטעם שלהם ואת innervations שלהם, ספירות תאי טעם וצורות, ועל להקל על ניתוחים של מערכות יחסים בין תאים transducing ומורפולוגיות עצב-arbor. שתי זרימות עבודה מוצגות גם במורד הזרם של שיטת הרכבה מלאה חדשנית זו להכנת רקמות: 1) לניתוח נפח בלוטות הטעם ו- innervation מוחלט ו -2) לתיוג גנטי של תאים דלילה של נוירוני טעם (עם תת-קבוצות של תאים ממחלימים בטעם המסומנים) וניתוחים הבאים של מורפולוגיה של ארבור עצב הטעם, מספר סוגי תאי הטעם וצורותיהם, ושימוש בתוכנת ניתוח תמונה כדי לנתח את היחסים הפיזיים בין תאים transducing ואלה בין transducing תאים וארבור העצבים שלהם. יחד, זרימות עבודה אלה מספקות גישה חדשנית להכנת רקמות ולניתחים של בלוטות טעם שלמות והמורפולוגיה המלאה של הארבורים הפנימיים שלהם.

Protocol

הערה: כל בעלי החיים טופלו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי מדיניות שירות הבריאות הציבורי של ארה”ב לגבי הטיפול האנושי והשימוש בחיות מעבדה ומדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. עכברי Phox2b-Cre (זן MMRRC 034613-UCD, NP91Gsat/Mmcd) או עכברי TrkBCreER (Ntrk2tm3.1(cre/ERT2)Ddg) גודלו עם עכברי כתב tdTomato (Ai14). אדוויליןקר…

Representative Results

הכתמת האפיתל הלינגואלי בנוגדנים ל- dsRed ו- keratin-8 (סמן בלוטות טעם כללי) שכותרתו הן בלוטות טעם שלמות והן כל הטעם הפנימי ב- Phox2b-Cre:עכברי tdTomato50,51 (איור 3A). הדמיית בלוטות הטעם האלה מהנקבוביות לבסיסים שלהן נתנה את התמונות המישוריות x-y ברזולוציה הגבוהה ב…

Discussion

התפתחות גישה לאיסוף והכתמה עקבית של בלוטות טעם שלמות משלושה אזורי טעם חלל הפה (פטריות, ברית מילה והחך) מספקת שיפורים משמעותיים לניתוח תאים ממחליפו טעם, מעקב אחר תאים משולבים חדשים, פנימיות ויחסים בין מבנים אלה. בנוסף, זה מקל על לוקליזציה של סמן נוירון משני פוטנציאלי הן בתוך או מחוץ לאוכלוסי…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אנו מודים ל-Kavisca Kuruparanantha על תרומתה להכתמת רקמות והדמיה של בלוטות טעם מקיפות, ג’ניפר שו על הכתמתה והדמיה של פנימיות לפפילה, לקרן קייט לטיפול בבעלי חיים וגנוטיפינג, וללקון מא על הכתמת הרקמה שלה בבלוטות הטעם הרך.. פרויקט זה נתמך על ידי R21 DC014857 ו- R01 DC007176 ל- R.F.K ו- F31 DC017660 ל- L.O.

Materials

2,2,2-Tribromoethanol ACROS Organics AC421430100
2-Methylbutane ACROS 126470025
AffiniPure Fab Fragment Donkey Anti-Rabbit IgG Jackson ImmunoResearch 711-007-003 15.5μL/mL
Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG Jackson Immuno Research 712-605-150 (1:500)
AutoQuant X3 software  Media Cybernetics
Blunt End Forceps Fine Science Tools  FST 91100-12
Click-iT™ Plus EdU Cell Proliferation Kit Molecular Probes C10637 Follow kit instructions 
Coverglass Marienfeld 107242
Cytokeratin-8 Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB), (RRID: AB_531826)  Troma1 supernatant (1:50, store at 4°C)
Dissection Scissors (coarse) Roboz RS-5619
Dissection Scissors (fine) Moria MC19B
Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 ThermoFisher Scientific A21206 (1:500)
Donkey anti-Rabbit, Alexa Fluor® 555 ThermoFisher Scientific A31572 (1:500)
DyLight™ 405 AffiniPure Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG Jackson Immuno Research 805-477-008 (1:500)
Fluoromount G Southern Biotech 0100-01
Glass slides Fisher Scientific (Superfrost Plus Miscroscope Slides) 12-550-15
Goat anti-Car4 R&D Systems  AF2414 (1:500)
Imaris  Bitplane  pixel-based image analysis software
Neurolucida 360 + Explorer MBF Biosciences 3D vector based image analysis software
Normal Donkey Serum Jackson Immuno Research 017-000-121
Normal Rabbit Serum  Equitech-Bio, Inc SR30
Olympus FV1000 (multi-Argon laser with wavelengths 458, 488, 515 and additional HeNe lasers emitting 543 and 633)
Paraformaldehyde EMD PX0055-3 4% in 0.1M PB
Rabbit anti-dsRed Living Colors DsRed Polyclonal Antibody; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496) 632496 (1:500)
Rabbit anti-PLCβ2  Santa Cruz Biotechnology Cat# sc-206 (1:500)
Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous Fisher Scientific BP332-500
Sodium Phosphate Monobasic Fisher Scientific BP330-500
tert-Amyl alcohol Aldrich Chemical Company 8.06193
Tissue Molds Electron Microscopy Sciences 70180
Tissue-Tek® O.C.T. Compound Sakura 4583
Triton X-100 BIO-RAD #161-0407
Zenon™ Alexa Fluor™ 555 Rabbit IgG Labeling Kit ThermoFisher Scientific Z25305 Follow kit instructions 
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Clapp, T. R., Medler, K. F., Damak, S., Margolskee, R. F., Kinnamon, S. C. Mouse taste cells with G protein-coupled taste receptors lack voltage-gated calcium channels and SNAP-25. BMC Biology. 4 (1), 7 (2006).
  2. Clapp, T. R., Yang, R., Stoick, C. L., Kinnamon, S. C., Kinnamon, J. C. Morphologic characterization of rat taste receptor cells that express components of the phospholipase C signaling pathway. The Journal of Comparative Neurology. 468 (3), 311-321 (2004).
  3. Delay, R. J., Roper, S. D., Kinnamon, J. C. Ultrastructure of mouse vallate taste buds: II. Cell types and cell lineage. The Journal of Comparative Neurology. 253 (2), 242-252 (1986).
  4. Finger, T. E. Cell types and lineages in taste buds. Chemical Senses. 30, 54-55 (2005).
  5. Kataoka, S., et al. The candidate sour taste receptor, PKD2L1, is expressed by type III taste cells in the mouse. Chemical Senses. 33 (3), 243-254 (2008).
  6. Murray, R. Fine structure of gustatory cells in rabbit taste buds. Journal of Ultrastructure Research. 27 (5-6), 444 (1969).
  7. Murray, R. G., Murray, A. Fine structure of taste buds of rabbit foliate papillae. Journal of Ultrastructure Research. 19 (3), 327-353 (1967).
  8. Yang, R., Crowley, H. H., Rock, M. E., Kinnamon, J. C. Taste cells with synapses in rat circumvallate papillae display SNAP-25-like immunoreactivity. The Journal of Comparative Neurology. 424 (2), 205-215 (2000).
  9. Yee, C. L., Yang, R., Böttger, B., Finger, T. E., Kinnamon, J. C. “Type III” cells of rat taste buds: Immunohistochemical and ultrastructural studies of neuron-specific enolase, protein gene product 9.5, and serotonin. Journal of Comparative Neurology. 440 (1), 97-108 (2001).
  10. Zhang, Y., et al. Coding of sweet, bitter, and umami tastes. Cell. 112 (3), 293-301 (2003).
  11. Chandrashekar, J., et al. The taste of carbonation. Science. 326 (5951), 443-445 (2009).
  12. Oka, Y., Butnaru, M., Von Buchholtz, L., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. High salt recruits aversive taste pathways. Nature. 494 (7438), 472-475 (2013).
  13. Stratford, J. M., Larson, E. D., Yang, R., Salcedo, E., Finger, T. E. 5-HT3A-driven green fluorescent protein delineates gustatory fibers innervating sour-responsive taste cells: A labeled line for sour taste. Journal of Comparative Neurology. 525 (10), 2358-2375 (2017).
  14. Baumer-Harrison, C., et al. Optogenetic stimulation of type I GAD65(+) cells in taste buds activates gustatory neurons and drives appetitive licking behavior in sodium-depleted mice. The Journal of Neuroscience. 40 (41), 7795-7810 (2020).
  15. Nomura, K., Nakanishi, M., Ishidate, F., Iwata, K., Taruno, A. All-electrical Ca(2+)-independent signal transduction mediates attractive sodium taste in taste buds. Neuron. 106 (5), 816-829 (2020).
  16. Ohmoto, M., Jyotaki, M., Foskett, J. K., Matsumoto, I. Sodium-taste cells require Skn-1a for generation and share molecular features with sweet, umami, and bitter taste cells. eneuro. 7 (6), (2020).
  17. Roebber, J. K., Roper, S. D., Chaudhari, N. The role of the anion in salt (NaCl) detection by mouse taste buds. The Journal of Neuroscience. 39 (32), 6224-6232 (2019).
  18. Oka, Y., Butnaru, M., von Buchholtz, L., Ryba, N. J., Zuker, C. S. High salt recruits aversive taste pathways. Nature. 494 (7438), 472-475 (2013).
  19. Lewandowski, B. C., Sukumaran, S. K., Margolskee, R. F., Bachmanov, A. A. Amiloride-insensitive salt taste is mediated by two populations of type III taste cells with distinct transduction mechanisms. The Journal of Neuroscience. 36 (6), 1942-1953 (2016).
  20. Beidler, L. M., Smallman, R. L. Renewal of cells within taste buds. The Journal of Cell Biology. 27 (2), 263-272 (1965).
  21. Hamamichi, R., Asano-Miyoshi, M., Emori, Y. Taste bud contains both short-lived and long-lived cell populations. 神经科学. 141 (4), 2129-2138 (2006).
  22. Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. Common sense about taste: from mammals to insects. Cell. 139 (2), 234-244 (2009).
  23. Spector, A. C., Travers, S. P. The representation of taste quality in the mammalian nervous system. Behavoiral and Cognitive Neuroscience Reviews. 4 (3), 143-191 (2005).
  24. Huang, T., Ohman, L. C., Clements, A. V., Whiddon, Z. D., Krimm, R. F. Variable branching characteristics of peripheral taste neurons indicates differential convergence. bioRxiv. , (2020).
  25. Taruno, A., et al. CALHM1 ion channel mediates purinergic neurotransmission of sweet, bitter and umami tastes. Nature. 495 (7440), 223-226 (2013).
  26. Kinnamon, J. C., Taylor, B. J., Delay, R. J., Roper, S. D. Ultrastructure of mouse vallate taste buds. I. Taste cells and their associated synapses. The Journal of comparative neurology. 235 (1), 48-60 (1985).
  27. Dando, R., et al. A permeability barrier surrounds taste buds in lingual epithelia. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 308 (1), 21-32 (2015).
  28. Mistretta, C. M. Permeability of tongue epithelium and its relation to taste. American Journal of Physiology. 220 (5), 1162-1167 (1971).
  29. Michlig, S., Damak, S., Le Coutre, J. Claudin-based permeability barriers in taste buds. The Journal of Comparative Neurology. 502 (6), 1003-1011 (2007).
  30. Kinnamon, S. C., Finger, T. E. Recent advances in taste transduction and signaling. F1000Research. 8, 2117 (2019).
  31. Meng, L., Huang, T., Sun, C., Hill, D. L., Krimm, R. BDNF is required for taste axon regeneration following unilateral chorda tympani nerve section. Experimental Neurology. 293, 27-42 (2017).
  32. Meng, L., Ohman-Gault, L., Ma, L., Krimm, R. F. Taste bud-derived BDNF is required to maintain normal amounts of innervation to adult taste buds. eneuro. 2 (6), (2015).
  33. Tang, T., Rios-Pilier, J., Krimm, R. Taste bud-derived BDNF maintains innervation of a subset of TrkB-expressing gustatory nerve fibers. Molecular and Cellular Neuroscience. 82, 195-203 (2017).
  34. Zhang, G. H., Zhang, H. Y., Deng, S. P., Qin, Y. M. Regional differences in taste bud distribution and -gustducin expression patterns in the mouse fungiform papilla. Chemical Senses. 33 (4), 357-362 (2008).
  35. Huang, T., Ma, L., Krimm, R. F. Postnatal reduction of BDNF regulates the developmental remodeling of taste bud innervation. 发育生物学. 405 (2), 225-236 (2015).
  36. Nosrat, I. V., Margolskee, R. F., Nosrat, C. A. Targeted taste cell-specific overexpression of brain-derived neurotrophic factor in adult taste buds elevates phosphorylated TrkB protein levels in taste cells, increases taste bud size, and promotes gustatory innervation. Journal of Biological Chemistry. 287 (20), 16791-16800 (2012).
  37. Liebl, D. J., Mbiene, J. -. P., Parada, L. F. NT4/5 mutant mice have deficiency in gustatory papillae and taste bud formation. 发育生物学. 213 (2), 378-389 (1999).
  38. Kumari, A., Yokota, Y., Li, L., Bradley, R. M., Mistretta, C. M. Species generalization and differences in Hedgehog pathway regulation of fungiform and circumvallate papilla taste function and somatosensation demonstrated with sonidegib. Scientific Reports. 8 (1), (2018).
  39. Venkatesan, N., Boggs, K., Liu, H. X. Taste bud labeling in whole tongue epithelial sheet in adult mice. Tissue Engineering. Part C, Methods. 22 (4), 332-337 (2016).
  40. Meisel, C. T., Pagella, P., Porcheri, C., Mitsiadis, T. A. Three-dimensional imaging and gene expression analysis upon enzymatic isolation of the tongue epithelium. Frontiers in Physiology. 11, 825 (2020).
  41. Schmitz, C., Hof, P. R. Design-based stereology in neuroscience. 神经科学. 130 (4), 813-831 (2005).
  42. Guagliardo, N. A., Hill, D. L. Fungiform taste bud degeneration in C57BL/6J mice following chorda-lingual nerve transection. The Journal of Comparative Neurology. 504 (2), 206-216 (2007).
  43. Ohtubo, Y., Yoshii, K. Quantitative analysis of taste bud cell numbers in fungiform and soft palate taste buds of mice. Brain Research. 1367, 13-21 (2011).
  44. Ogata, T., Ohtubo, Y. Quantitative analysis of taste bud cell numbers in the circumvallate and foliate taste buds of mice. Chemical Senses. 45 (4), 261-273 (2020).
  45. Tomchik, S. M., Berg, S., Kim, J. W., Chaudhari, N., Roper, S. D. Breadth of tuning and taste coding in mammalian taste buds. Journal of Neuroscience. 27 (40), 10840-10848 (2007).
  46. Finger, T. E. ATP signaling is crucial for communication from taste buds to gustatory nerves. Science. 310 (5753), 1495-1499 (2005).
  47. Lau, J., et al. Temporal control of gene deletion in sensory ganglia using a tamoxifen-inducible Advillin-CreERT2 recombinase mouse. Molecular Pain. 7 (1), 100 (2011).
  48. Hirsch, M. -. R., D’Autréaux, F., Dymecki, S. M., Brunet, J. -. F., Goridis, C. APhox2b::FLPotransgenic mouse line suitable for intersectional genetics. genesis. 51 (7), 506-514 (2013).
  49. Perea-Martinez, I., Nagai, T., Chaudhari, N. Functional cell types in taste buds have distinct longevities. PLoS ONE. 8 (1), 53399 (2013).
  50. Ohman-Gault, L., Huang, T., Krimm, R. The transcription factor Phox2b distinguishes between oral and non-oral sensory neurons in the geniculate ganglion. Journal of Comparative Neurology. 525 (18), 3935-3950 (2017).
  51. Dvoryanchikov, G., et al. Transcriptomes and neurotransmitter profiles of classes of gustatory and somatosensory neurons in the geniculate ganglion. Nature Communications. 8 (1), (2017).
  52. Whitehead, M. C., Ganchrow, J. R., Ganchrow, D., Yao, B. Organization of geniculate and trigeminal ganglion cells innervating single fungiform taste papillae: a study with tetramethylrhodamine dextran amine labeling. 神经科学. 93 (3), 931-941 (1999).
  53. Suemune, S., et al. Trigeminal nerve endings of lingual mucosa and musculature of the rat. Brain Research. 586 (1), 162-165 (1992).
  54. Rutlin, M., et al. The cellular and molecular basis of direction selectivity of Aδ-LTMRs. Cell. 159 (7), 1640-1651 (2014).
  55. Abraira, V. E., Ginty, D. D. The sensory neurons of touch. Neuron. 79 (4), 618-639 (2013).
  56. Feng, P., Huang, L., Wang, H. Taste bud homeostasis in health, disease, and aging. Chemical Senses. 39 (1), 3-16 (2014).
  57. Cooper, K. W., et al. COVID-19 and the chemical senses: supporting players take center stage. Neuron. 107 (2), 219-233 (2020).
  58. Barlow, L. A. Progress and renewal in gustation: new insights into taste bud development. Development. 142 (21), 3620-3629 (2015).
  59. Roper, S. D. Taste buds as peripheral chemosensory processors. Seminars in Cell & Developmental Biology. 24 (1), 71-79 (2013).
  60. Ma, H., Yang, R., Thomas, S. M., Kinnamon, J. C. BMC. 神经科学. 8 (1), 5 (2007).
  61. Kinnamon, J. C., Sherman, T. A., Roper, S. D. Ultrastructure of mouse vallate taste buds: III. Patterns of synaptic connectivity. The Journal of Comparative Neurology. 270 (1), 1-10 (1988).
  62. Romanov, R. A., et al. Chemical synapses without synaptic vesicles: Purinergic neurotransmission through a CALHM1 channel-mitochondrial signaling complex. Science Signaling. 11 (529), 1815 (2018).
  63. Dani, A., Huang, B., Bergan, J., Dulac, C., Zhuang, X. Superresolution imaging of chemical synapses in the brain. Neuron. 68 (5), 843-856 (2010).
  64. Vandenbeuch, A., Clapp, T. R., Kinnamon, S. C. Amiloride-sensitive channels in type I fungiform taste cells in mouse. BMC Neuroscience. 9 (1), 1 (2008).
  65. Bartel, D. L., Sullivan, S. L., Lavoie, &. #. 2. 0. 1. ;. G., Sévigny, J., Finger, T. E. Nucleoside triphosphate diphosphohydrolase-2 is the ecto-ATPase of type I cells in taste buds. The Journal of Comparative Neurology. 497 (1), 1-12 (2006).
  66. Wilson, C. E., Vandenbeuch, A., Kinnamon, S. C. Physiological and behavioral responses to optogenetic stimulation of PKD2L1+ type III taste cells. eneuro. 6 (2), (2019).

Tags

Whole-mount StainingTaste BudsFungiformCircumvallatePalateLingual EpitheliumInnervationTransducing CellsOCT Compound

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Ohman, L. C., Krimm, R. F. Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds. J. Vis. Exp. (168), e62126, doi:10.3791/62126 (2021).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image