Dit artikel beschrijft ischemie-reperfusie (I / R) modellering in een 3-daags kuikenembryo met behulp van een spinale naald aangepaste haak om de I / R-ontwikkeling en -behandeling beter te begrijpen. Dit model is eenvoudig, snel en goedkoop.
Ischemie en reperfusie (I / R) aandoeningen, zoals myocardinfarct, beroerte en perifere vaatziekten, zijn enkele van de belangrijkste oorzaken van ziekte en overlijden. Veel in vitro en in vivo modellen zijn momenteel beschikbaar voor het bestuderen van het I/R-mechanisme in ziekte of beschadigde weefsels. Tot op heden is er echter geen in ovo I / R-model gemeld, wat een beter begrip van I / R-mechanismen en snellere screening van geneesmiddelen mogelijk zou maken. Dit artikel beschrijft I / R-modellering met behulp van een spinale naald aangepaste haak in een 3-daags kuikenembryo om I / R-ontwikkelings- en behandelingsmechanismen te begrijpen. Ons model kan worden gebruikt om afwijkingen op DNA-, RNA- en eiwitniveau te onderzoeken. Deze methode is eenvoudig, snel en goedkoop. Het huidige model kan onafhankelijk of in combinatie met bestaande in vitro en in vivo I/R-modellen worden gebruikt.
Ischemie-reperfusie weefselbeschadiging is in verband gebracht met een aantal pathologieën, waaronder hartaanvallen, ischemische beroerte, trauma en perifere vaatziekten1,2,3,4,5. Dit is voornamelijk te wijten aan een gebrek aan een uitgebreid begrip van de ziekteprogressie en het ontbreken van een effectief onderzoeksmodel. Ischemische schade treedt op wanneer de bloedtoevoer naar een specifiek deel van het weefsel wordt afgesneden. Als gevolg hiervan necrotiseert ischemisch weefsel uiteindelijk, hoewel de snelheid varieert afhankelijk van het weefsel. Daarom kan het herstellen van de bloedtoevoer helpen om de schade te beperken. In sommige gevallen is echter waargenomen dat reperfusie meer weefselschade veroorzaakt dan ischemie alleen6,7,8. Daarom is het begrijpen van de moleculaire en cellulaire mechanismen van ischemie-reperfusie vereist om een effectieve therapeutische interventie te ontwikkelen. Momenteel is er geen effectieve behandeling voor I/R-letsels bekend. Deze ongelijkheid heeft geleid tot de creatie van nieuwe experimentele modellen, variërend van in vitro tot in vivo modellen, om het bestaande probleem aan te pakken9,10,11,12,13.
Kuikenembryo’s (Gallus gallus domesticus) worden veel gebruikt in onderzoek vanwege hun gemakkelijke toegang, ethische aanvaardbaarheid, relatief grote omvang (in vergelijking met andere embryo’s), lage kosten en snelle groei14. We gebruikten een kuikenembryo na 72 uur ontwikkeling om een in ovo I / R te creëren door de juiste vitelline-slagader af te sluiten en vrij te geven met behulp van een spinale naald. We noemden het het Hook-I/R ischemie-reperfusiemodel (figuur 1). Het model dat in deze studie wordt gebruikt, is in staat om alle stroomafwaartse processen nauwkeurig te simuleren, inclusief oxidatieve en inflammatoire routes, die vaak worden geassocieerd met I / R-schade15,16,17.
Het doel van ischemie-reperfusieonderzoek is om therapeutische strategieën te creëren die celdood voorkomen en herstel bevorderen29,30. Om de huidige beperkingen in I/R-onderzoek te overwinnen, hebben we een Hook I/R-kuikenembryomodel ontworpen om een betrouwbaar en reproduceerbaar I/R-model te produceren. Voor zover wij weten, is het onze het eerste I / R-model ooit gemaakt in een 3-daags kuikenembryo voor routinematige I / R-experimenten, naast het bestuderen…
The authors have nothing to disclose.
We willen onze dankbaarheid uitspreken aan Hari Shankar voor zijn kritische input tijdens videografie en montage, de heer Baqer Hussain voor voice-over, de heer Asghar Rizvi voor videobewerking, de heer Mohammad Haider voor video-opnamen, de heer Mohammad Danish Siddiqui voor hulp tijdens de experimenten.
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |