Un modèle de sténose valvulaire aortique de lapin induite par une lésion directe par ballonnet

Summary

Un modèle animal approprié est nécessaire pour comprendre les mécanismes pathologiques sous-jacents à la sténose valvulaire aortique (SVA) et pour évaluer l’efficacité des interventions thérapeutiques. Le présent protocole décrit une nouvelle procédure pour le développement du modèle de lapin AVS via une blessure directe par ballonnet in vivo.

Abstract

Les modèles animaux apparaissent comme un outil important pour comprendre les mécanismes pathologiques sous-jacents à la sténose valvulaire aortique (SVA) en raison du manque d’accès à des sources fiables de valves aortiques humaines malades. Parmi les différents modèles animaux, les modèles de lapins AVS sont l’un des plus couramment utilisés dans les études sur les grands animaux. Cependant, les modèles traditionnels de lapins AVS nécessitent une longue période de supplémentation alimentaire et de manipulation génétique pour induire une sténose significative de la valve aortique, ce qui limite leur utilisation dans les études expérimentales. Pour remédier à ces limitations, un nouveau modèle de lapin AVS est proposé, dans lequel la sténose est induite par une lésion directe de la valve aortique par ballonnet. Le présent protocole décrit une technique efficace pour induire l’AVS chez les lapins blancs de Nouvelle-Zélande (NZW), avec des procédures étape par étape pour la préparation, l’intervention chirurgicale et les soins postopératoires. Ce modèle simple et reproductible offre une approche prometteuse pour l’étude de l’initiation et de la progression de l’AVS et constitue un outil précieux pour étudier les mécanismes pathologiques sous-jacents de la maladie.

Introduction

Il est de plus en plus reconnu que l’utilisation de modèles animaux appropriés peut contribuer à une meilleure compréhension des mécanismes pathologiques sous-jacents à la sténose valvulaire aortique (SVA) en raison du manque d’accès à des sources fiables de valves aortiques humaines malades associées à la progression de la sténose aortique (SA). Parmi les différents modèles animaux pour l’étude de l’AVS, les lapins sont l’un des modèles AVS les plus couramment utilisés pour les grands animaux, et le modèle AVS du lapin est induit soit par une supplémentation en cholestérol/vitamine D2, soit par des manipulations génétiques 1,2,3,4.

Bien que les modèles AVS de lapin aient fourni des informations significatives sur le développement et la progression de l’AVS, il reste encore difficile d’induire l’AVS de manière cohérente et reproductible, comme on l’a vu dans nos expériences préliminaires.

En plus des modèles animaux induits par l’alimentation et génétiquement prédisposés, un nouveau modèle d’AVS a été établi par lésion mécanique directe chez la souris ^5,6. Le modèle de lésion mécanique induit avec succès une sténose aortique et représente un modèle AVS simple et reproductible chez les souris de type sauvage. À notre connaissance, il n’y a pas eu d’études antérieures examinant les effets d’une lésion mécanique sur la valve aortique dans des modèles de lapin. Ainsi, cette étude fournit une nouvelle procédure pour induire l’AVS chez les lapins blancs mâles de Nouvelle-Zélande par une lésion directe de la valve aortique par ballonnet, qui peut imiter avec précision l’état de sténose aortique valvulaire. Ce protocole comprend des descriptions étape par étape de la préparation, de l’intervention chirurgicale et des soins postopératoires, qui sont utiles pour induire des modèles de lapin AVS reproductibles.

Protocol

Toutes les procédures de recherche sur les animaux ont été approuvées et exécutées conformément à la loi sur le bien-être des animaux de laboratoire, au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et aux directives et politiques pour l’expérimentation animale fournies par le Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux (IACUC) du Collège de médecine de l’Université catholique de Corée (numéro d’approbation : CUMC-2021-0176-05). La présente étude a utilis…

Representative Results

Modèle AVS de lapin induit par une lésion valvulaire aortiquePour induire le modèle AVS de lapin, des lapins NZW mâles pesant 3,5 à 4,0 kg ont été utilisés pour cette étude. Selon les procédures chirurgicales décrites à l’étape 2 (Figure 2), le modèle AVS a été établi par lésion valvulaire aortique, ce qui a entraîné une dégénérescence et une calcification de la valve aortique mécanique. Le groupe témoin comprenait des lapins nourris avec un r?…

Discussion

Les modèles de SVA chez l’animal sont couramment utilisés pour étudier les aspects pathologiques du SVA, y compris l’initiation et la progression du SVA. Ce protocole introduit un nouveau modèle AVS de lapin induit par une lésion directe de la valve aortique par ballonnet. Dans cette étude, le modèle de lésion valvulaire aortique a montré un épaississement et une calcification significatifs des feuillets. Par rapport au modèle AVS léger induit par une supplémentation alimentaire, la valve aortique dans l…

Materials

3-0 Silk suture	AILEE	SK312
4% paraformaldehyde(PFA)	Intron	IBS-BP031-2
Alizarin red Solution	Millpore	TMS-008-C
ASAHI SION BLUE	ASAHI		Guide wire
Back Table Cover	Yuhan kimberly	80101-30
Balloon In-deflation Device	Demax Medical	DID30s
Bionet Veterinary monitor	BIONET	BM3 VET
C-Arm	SIEMENS Healthcare GmbH	Cios alpha
Certified Rabbit Diet	Purina	5322	4.7% Hydrogenated Coconut Oil, 0.5% Cholesterol, & 1% Molasse
Curadle Smart Incubator	Autoelex	CS-CV206	Intensive Care Unit (ICU)
Ergocalciferol	Sigma-aldrich	E5750	Vitamin D2
Fechtner conjunctiva forceps titanium	WORLD PRECISSION Instrument	WP1820
Forceps	HEBU	HB203
Gentamicin	Shin Poong
Glycopyrrolate	SamChunDang
Greenflex NS	DAI HAN PHARM		Normal saline 500 mL
Hematoxylin solution	Sigma-aldrich	HT1079-1 SET
Heparin	JW pharmaceutical		25,000 U
Infusion set for single use	SWOON MEDICAL
Iodine	Green pharmaceutical
Iodixanol	GE Healthcare	Visipaque	Inflation solution (contrast agent)
IV catheter 22 G	BD	382423
IV catheter 24 G	BD	382412
Ketoprofen	SamChunDang
Luer-Lok syringe 10 mL	Becton Dickinson Medical
Luer-Lok syringe 3 mL	Becton Dickinson Medical
Microscope	OLYMPUS	SZ61
Microtome	ThermoFisher Scientific	HM 325
MT stain kit	Sigma-aldrich	HT15-1kt
Needel holder	Solco	009-1304
Needle Holder with Lock and Suture	JEUNGDO BIO & PLANT	H-1222-18
Paraffin	LK LABKOREA	H06-660-107
PBS	Gibco	10010-023
Potassium chloride 40	Daihan Pharm		KCl
Prelude Ideal Hydrophilic Sheath	MERIT MEDICAL	PID4F11018SS	Sheath 4F
PTA Balloon Dilatation catheter	Boston Scientific	H749-3903280208-0	Balloon catheter 8.0 mm
Rompun	Elanco		Xylaxine
sterile Gauze	DAE HAN Medical		10 cm x 20 cm
Surgical Gloves	Ansell	Ansell
Surgical Gown	Yuhan kimberly	90002-02
Surgical Scissors	Nopa, Germany	AC020/16
Surgical Tape	3M micopore	1530-1
Syringe 1 mL	Shin Chang Medical
Syringe 10 mL	Shin Chang Medical
Tissue cassette	Scilav korea	Cas3003
Transducer gel	SUNGHEUNG	SH102
Tridol	Yuhan Corp.		Tramadol HCl
Ultrasound system	Philps	Affiniti 50
Von Kossa stain kit	Abcam	ab105689
Zoletil 50	Virbac korea		Tiletamine & zolazepam