في هذا البروتوكول ، تم تحسين تقنية معالجة زيت الضأن ل Epimedii folium (EF) من خلال تطبيق منهجية سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken ، وتم التحقيق بشكل أولي في تأثير EF الخام والمحسنة المستخرجة بالماء على التطور الجنيني لسمك الزرد.
كطب صيني تقليدي (TCM) ، فإن Epimedii folium (EF) له تاريخ في الطب والغذاء > عمره 2000 عام. سريريا ، غالبا ما يستخدم EF المعالج بزيت لحم الضأن كدواء. في السنوات الأخيرة ، زادت تدريجيا تقارير مخاطر السلامة وردود الفعل السلبية للمنتجات التي تستخدم EF كمادة خام. يمكن أن تؤدي المعالجة إلى تحسين سلامة الطب الصيني التقليدي بشكل فعال. وفقا لنظرية الطب الصيني التقليدي ، يمكن أن تقلل معالجة زيت الضأن من سمية EF وتعزز تأثيرها التنغيم على الكلى. ومع ذلك ، هناك نقص في البحث والتقييم المنهجي لتكنولوجيا معالجة زيت الضأن EF. في هذه الدراسة ، استخدمنا منهجية سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken لتحسين المعلمات الرئيسية لتكنولوجيا المعالجة من خلال تقييم محتويات المكونات المتعددة. أظهرت النتائج أن تقنية معالجة زيت الضأن المثلى ل EF كانت على النحو التالي: تسخين زيت لحم الضأن عند 120 درجة مئوية ± 10 درجة مئوية ، وإضافة EF الخام ، وقليه برفق إلى 189 درجة مئوية ± 10 درجة مئوية حتى يصبح لامعا بالتساوي ، ثم إزالته وتبريده. لكل 100 كجم من EF ، يجب استخدام 15 كجم من زيت لحم الضأن. تمت مقارنة السمية والمسخة لمستخلص مائي من EF الخام وزيت الضأن المعالج في نموذج نمو جنين الزرد. أظهرت النتائج أن مجموعة الأعشاب الخام كانت أكثر عرضة للتسبب في تشوهات الزرد ، وكان تركيز EF المميت نصف الأقصى أقل. في الختام ، كانت تقنية معالجة زيت الضأن المحسنة مستقرة وموثوقة ، مع إمكانية تكرار جيدة. عند جرعة معينة ، كان المستخلص المائي من EF ساما لتطور أجنة الزرد ، وكانت السمية أقوى بالنسبة للدواء الخام من الدواء المعالج. أظهرت النتائج أن معالجة زيت الضأن قللت من سمية الخام EF. يمكن استخدام هذه النتائج لتحسين الجودة والتوحيد والسلامة السريرية ل EF المعالج بزيت الضأن.
Epimedii folium (EF) هي الأوراق المجففة ل Epimedium brevicornu Maxim. ، Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) مكسيم ، إبيمديوم بوبيسنسنس مكسيم ، أو إبيميديوم كوريانوم ناكاي. يمكن استخدام EF لعلاج هشاشة العظام ومتلازمة انقطاع الطمث وكتل الثدي وارتفاع ضغط الدم وأمراض القلب التاجية وأمراض أخرى1. كطب صيني تقليدي (TCM) ، تتمتع EF بتاريخ في الطب والغذاء لأكثر من 2000 عام. نظرا لانخفاض سعره وتأثيره الملحوظ في تنغيم الكلى ، فإنه يستخدم على نطاق واسع في الأدوية والأطعمة الصحية. تتم معالجة EF عن طريق قليها بزيت لحم الضأن ، وهي عملية تم وصفها لأول مرة في نظرية معالجة Lei Gong التي كتبها Lei Xiao في فترة Liu Song2. تختلف كفاءة EF الخام و EF المقلي تماما. يبدد EF الخام الروماتيزم بشكل أساسي ، في حين أن EF المقلي يسخن الكلى لتعزيز يانغ3. في الوقت الحاضر ، يستخدم EF على نطاق واسع كمادة خام في الأدوية والأطعمة الصحية. هناك 399 دواء صيني مدرج ، وتسعة أغذية صحية مستوردة ، و 455 من الأطعمة الصحية المحلية مع EF كمادة خام4. هذه المواد الطبية لديها آفاق تطبيق كبيرة. ومع ذلك ، في السنوات الأخيرة ، كانت هناك تقارير متزايدة عن ردود الفعل السلبية وإصابة الكبد البشري الناجمة عن الأطعمة الصحية وأدوية براءات الاختراع الصينية التي تستخدم EF كمادة خام ، وقد ذكرت دراسات السمية ذات الصلة5،6،7 أن EF كمادة خام لها مخاطر محتملة على السلامة.
تشير المعالجة الطبية الصينية إلى التقنيات الصيدلانية التي يمكن أن تقلل بشكل فعال أو تقضي على السمية وتحسن سلامة الطب الصيني التقليدي. طريقة المعالجة التقليدية ل EF هي القلي السريع بزيت لحم الضأن ، مما يقلل من سمية EF ويعزز تأثيره في تدفئة الكلى وتعزيز يانغ8. يتم تضمين طريقة المعالجة هذه في دستور الأدوية الصيني ومواصفات المعالجة المختلفة1. يتم تحديد عملية EF فقط على النحو التالي: لكل 100 كجم من EF ، تتم إضافة 20 كجم من الزيت الأمنيوسي (المكرر) ، ويتم إطلاقه بشكل خفيف حتى يصبح موحدا ولامعا1. لا توجد معلمات صارمة لطريقة معالجة EF في المعايير المذكورة أعلاه ، لذلك لم يتم توحيد مواصفات المعالجة المحلية لتوفير الاتساق. لذلك ، سيكون من المفيد إجراء دراسة منهجية لعملية EF. في هذا البحث ، تم استخدام طريقة سطح التصميم والاستجابة التجريبية Box-Behnken لتحسين تقنية معالجة EF.
التصميم التجريبي Box-Behnken هو طريقة تستخدم عادة لتحسين العوامل في العملية. يمكن تحسين معلمات الاستخراج من خلال إنشاء العلاقة الوظيفية بين عوامل ملاءمة معادلة الانحدار المتعددة وقيم التأثير. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام هذه الطريقة على نطاق واسع لدراسة استخراج الطب الصيني التقليدي5،6،7 ومعالجة9،10،11. أبلغت دراسات مختلفة عن طرق تحضير الطب الصيني التقليدي التي تتضمن معالجة الملح ومعالجة النبيذ والقلي السريع وفقا لتصميم Box-Behnken ، مثل Psoraleae fructus 12 المعالج بالملح ، و Cnidii fructus13 المعالج بالنبيذ ، و Cinnamomi ramulus14 المحمص. لقد قللت هذه الطريقة من وقت الاختبار ، ودقة الاختبار العالية ، وهي مناسبة للاختبارات متعددة العوامل ومتعددة المستويات. الطريقة أبسط من طريقة اختبار التصميم المتعامد وأكثر شمولا من طريقة التصميم الموحدة15. يمكن للعلاقات التي تم الحصول عليها تحديد القيمة المتوقعة لأي نقطة اختبار ضمن نطاق الاختبار ، وهي ميزة كبيرة. يمكن استخدام نموذج الزرد لاختبار ما إذا كانت EF أقل سمية بعد المعالجة.
في دراسات سمية الطب الصيني التقليدي ، يتمتع نموذج الزرد بمزايا مزدوجة تتمثل في الإنتاجية العالية لتجارب الخلايا وأوجه التشابه مع تجارب القوارض16. يتميز هذا النموذج بصغر حجمه وارتفاع معدل التفريخ ودورة التكاثر القصيرة وسهولة التكاثر. يمكن استخدام النموذج في التجارب المتزامنة واسعة النطاق في لوحات زراعة الخلايا ، وجرعة الدواء التجريبية صغيرة ، والدورة التجريبية قصيرة ، والتكلفة منخفضة ، والعملية التجريبية بأكملها سهلة الملاحظة والتشغيل17. أجنة الزرد شفافة وتتطور بسرعة. لذلك ، يمكن ملاحظة السمية والآثار المسخية للأدوية على الأنسجة الحشوية في مراحل النمو المختلفة مباشرة تحت المجهر18. يصل التماثل الجيني بين الزرد والبشر إلى 85٪ 18. يشبه مسار نقل إشارة الزرد مسار البشر18. التركيب البيولوجي والوظيفة الفسيولوجية لسمك الزرد متشابهان إلى حد كبير مع تلك الموجودة في الثدييات18. لذلك ، يمكن أن يوفر نموذج الزرد لاختبار المخدرات تجريبية موثوقة وقابلة للتطبيق بشكل كامل على البشر19.
في هذه الدراسة ، استخدمنا منهجية سطح استجابة التصميم Box-Behnken لتحسين كمية ودرجة حرارة زيت الضأن ودرجة حرارة القلي المستخدمة في تقنية معالجة EF ، مع محتويات icariin و epimedin A و epimedin B و epimedin C و baohuoside I كمؤشرات تقييم. تم استخدام نموذج الزرد لاستكشاف أولي لتأثير مستخلص الماء EF على التطور الجنيني لسمك الزرد قبل وبعد المعالجة لتقييم تأثير التوهين للمعالجة على EF.
المتغيرات المستقلة وتحديد مستوياتها
تم وصف تقنية معالجة EF فقط في إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني ومواصفات معالجة الأدوية الصينية المحلية المنشورة من قبل 26 مقاطعة وبلدية ومنطقة ذاتية الحكم في جميع أنحاء البلاد1. يتضمن الوصف الخطوات التالية: أخذ زيت لحم الضأن وتسخي…
The authors have nothing to disclose.
يتم دعم هذا العمل من قبل مشروع أعمال البحث العلمي الأساسي لأكاديمية تشونغتشينغ للطب الصيني التقليدي (رقم المشروع: jbky20200013) ، ومشروع توجيه حوافز الأداء لمؤسسات البحث العلمي في تشونغتشينغ (رقم المشروع: cstc2021jxjl 130025) ، ومشروع بناء الانضباط الرئيسي للجنة الصحة البلدية في تشونغتشينغ لمعالجة المواد الطبية الصينية.
Acetonitrile | Fisher | 197164 | |
Baohuoside ![]() ![]() |
Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd. | MUST-20042402 | |
Chromatographic column | Waters Corporation | Symmetry C18 | |
Design Expert software | Stat- Ease Inc., Minneapolis, MN | Trial Version8.0.6.1 | |
Detector | Waters Corporation | 2998 | |
Disintegrator | Hefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd. | S-FS553 | |
Electronic analytical balance | Mettler-Toledo International Inc. | MS205DU | |
Epimedin A (EA) | Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd. | MUST-21112118 | |
Epimedin B (EB) | Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd. | MUST-20080403 | |
Epimedin C (EC) | Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd. | MUST-20080310 | |
Ethanol | Chongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd. | 20180801 | |
Graphpad software | GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA | 6.02 | |
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) | Waters Corporation | 2695 | |
Icariin | Chengdu Glip Biotechnology Co., Ltd. | 21091401 | |
Methanol | Chongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd. | 20171101 | |
Microporous membrane | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd. | 0.22μm | |
Mutton oil | Kuoshan Zhiniu Fresh Food Store | 20211106 | |
Office Excel office software | Microsoft | Office Excel 2021 | |
Pharmacopoeia sieve | Shaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd. | R40/3 | |
Pure water machine | Chongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd. | AT Sro 10A | |
Qualitative filter paper | Shanghai Leigu Instrument Co., Ltd. | 18cm | |
Stereomicroscope | Carl Zeiss, Oberkochen, Germany | Stemi 2000 | |
Ultrasonic cleaner | Branson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd. | BUG25-12 | |
Zebrafish | China Zebrafish Resource Center (CZRC) | The AB strain |