Blutentnahme der Vena subclavia bei bewussten Ratten

Summary

Hier stellen wir eine Kombination aus effektiver Rattenrestriktion und Subclaviavenenpunktionsmethoden vor, die eine schnelle, sichere und wiederholte Blutentnahme bei Ratten ohne Anästhesie ermöglichen.

Abstract

Es gibt mehrere etablierte Methoden zur Gewinnung wiederholter Blutproben von Ratten, wobei die am häufigsten verwendeten Methoden die laterale Schwanzvenenentnahme ohne Anästhesie und die Jugularvenenentnahme mit Anästhesie sind. Die meisten dieser Methoden erfordern jedoch Hilfe und Anästhesiegeräte und werfen manchmal Schwierigkeiten in Bezug auf die Blutentnahme oder die schlechte Qualität der Blutproben auf. Darüber hinaus verbrauchen diese Methoden der Blutentnahme viel Zeit und personelle Ressourcen, wenn bei einer großen Anzahl von Ratten wiederholte Blutentnahmen erforderlich sind. In dieser Studie wird eine Technik zur wiederholten Blutentnahme bei nicht anästhesierten Ratten durch eine einzelne kompetente Person vorgestellt. Sehr zufriedenstellende Blutproben können durch Punktion der Vena subclavia gewonnen werden. Die Methode zeigte eine beeindruckende Gesamterfolgsrate von 95 % mit einer medianen Zeit von nur 2 Minuten von der Fixierung der Ratte bis zum Abschluss der Blutentnahme. Darüber hinaus fügt die Durchführung von aufeinanderfolgenden Blutentnahmen innerhalb des vorgesehenen Bereichs den Ratten keinen Schaden zu. Diese Methode ist es wert, für die Blutentnahme gefördert zu werden, insbesondere in groß angelegten pharmakokinetischen Studien.

Introduction

Ratten gehören zu den häufigsten Versuchstieren, und es gibt viele Möglichkeiten, Blutproben zu gewinnen. Bei Experimenten mit einer einzigen Blutentnahme in der Schlussphase kann eine ausreichende Menge Blut durch Herzpunktion oder Blutentnahme aus der Bauchaorta gewonnen werden¹. Einige Studien erfordern jedoch eine wiederholte Blutentnahme von Ratten für routinemäßige Blut- oder biochemische Analysen, insbesondere bei pharmakokinetischen und toxikologischen Studien, bei denen eine wiederholte Blutentnahme erforderlich ist, um die Resorption, Verteilung und den Metabolismus von Arzneimitteln zu bestimmen².

Obwohl die Blutentnahme aus der Schwanzvene die häufigste Methode für die Blutentnahme von Ratten ist, obwohl keine Anästhesie erforderlich ist, kann diese Methode bei wiederholten Blutentnahmen eine Herausforderung darstellen, und die Menge des entnommenen Blutes ist relativ gering ^3,4. Obwohl Blut aus den Stamm- und Penisvenen entnommen werden kann, ist die gewonnene Blutmenge begrenzt und eine Anästhesie ist erforderlich ^1,5. Darüber hinaus liefern Blutproben, die aus dem submandibulären Venenplexus sowie aus den Venen sublingual, jugularis und subclavia entnommen werden, qualitativ hochwertigere Proben, erfordern jedoch in der Regel eine Anästhesie oder die Unterstützung mehrerer Personen 1,6,7,8,9. Schließlich erfordert die retroorbitale Sinus-/Kanalblutentnahme nicht nur eine Anästhesie, sondern kann auch zu Verletzungen und Stress bei den Ratten führen⁹.

Die Qualität von Blutproben, die typischerweise aus großen Venen gewonnen werden, entspricht in der Regel dem höchsten Standard¹. Gegenwärtig haben einige Studien ergeben, dass die kontinuierliche Mikroprobenahme durch die Halsvene eine sehr geeignete Methode für die toxikologische Forschung an Ratten ist, obwohl diese Methode in der Regel eine Halsvenenkatheterisierung erfordert 10,11,12. Daher lohnt es sich zu erforschen, wie man ohne chirurgischen Eingriff qualitativ hochwertige Blutproben nach dem 3R-Prinzip der Tierversuche gewinnen kann. Das Ziel dieser Studie war es, eine Methode zur effizienten Entnahme von Blut aus der Vena subclavia bei Ratten vorzustellen. Diese Technik ermöglicht die schnelle Entnahme zufriedenstellender Proben durch ein Ein-Personen-Verfahren, ohne dass eine Anästhesie erforderlich ist.

Protocol

Diese Studie entsprach den Richtlinien der 8. Auflage des Leitfadens für die Pflege und Verwendung von Labortieren13. Die Studie wurde von der Ethikkommission des Lanzhou University Second Hospital genehmigt und in Übereinstimmung mit den ARRIVE-Richtlinien 2.014 dokumentiert. Zwölf gesunde Wistar-Ratten (sechs Männchen mit einem Gewicht von 290-330 g und sechs Weibchen mit einem Gewicht von 250-280 g) im Alter von 12-16 Wochen wurden vor dem eigentlichen Experiment fü…

Representative Results

Hochwertige Plasmaproben weisen einen blassgelben Farbton, Klarheit und Transparenz auf, frei von jeglichem Rotstich oder Blutgerinnung, wie in Abbildung 2A dargestellt. Abbildung 2B zeigt die Hämolyse (linke Seite) bzw. die Gerinnung (rechte Seite) als Folge unsachgemäßer Eingriffe. Im Verlauf von 96 Blutabnahmesitzungen innerhalb von 4 Tagen betrugen die durchschnittlichen Einzelblutabnahmezeiten für die Gruppen A und B 11…

Discussion

Obwohl die Blutentnahme der Schwanzvene die häufigste Methode zur wiederholten Blutentnahme bei Ratten ist, kann sie durch Anästhesiemedikamente beeinflusst werden, und aufgrund der geringen Größe der Schwanzvene ist die Blutmenge, die in einem einzigen Fall entnommen werden kann, begrenzt, was zu einer längeren Blutentnahmedauer führt ^4,5. Obwohl Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC)-Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS)-Systeme in Kombination mit…

Materials

0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum