アメフラシカリフォルニのニューロンは、成長円錐の運動性と指導の高分解能イメージングのための優れている文化の中で大きな成長円錐を開発する。ここでは、アメフラシの袋の細胞ニューロンの解剖やメッキ用だけでなく、生細胞イメージングのためのチャンバーを設定するためのプロトコルを提示する。
神経成長円錐は、環境で指導の手がかりを検出し、適切な標的細胞に向けて方向性に、この情報を伝達することができる軸索の先端に非常に運動性構造です。完全なガイダンス情報が細胞表面から基盤となる動的な細胞骨格ネットワークに送信する方法を理解するためには、高い時間および空間分解能でのタンパク質の動態の生細胞イメージングに適したモデル系が必要です。典型的な脊椎動物の成長円錐は、定量的にF -アクチンと微小管のダイナミクスを分析するには小さすぎます。アメフラシアメフラシカリフォルニから神経細胞は、脊椎動物の神経細胞よりも5〜10倍も大きいです簡単に室温に保つことができるとマイクロマニピュレーションと生物物理学的測定のための非常に堅牢な細胞である。彼らの成長円錐は、非常に細胞質領域とも上述の細胞骨格系を定義している。神経細胞体は、成長円錐の運動性と指導を研究するためのプローブの様々なマイクロインジェクションすることができます。現在のプロトコルでは、腹部神経節の郭清のための手順を示す袋の細胞の神経細胞の培養と成長円錐の生細胞イメージングのためのイメージングチャンバーを設定。
アメフラシの袋セルのニューロンは非常に少数の非神経細胞に血清を含まない神経細胞培養系を提供しています。これらのニューロンは、重要な細胞生物学的な質問の数に対応するために適切な非常に大きな成長円錐を形成します。袋のセルのニューロンは、簡単に数時間かけて室温で操作して撮像することができます。蛍光を使用することで、1つは、定量的にF -アクチンと微小管の重合と転座のダイナミ…
我々は、解剖のビデオを編集すると援助のために私たちの手順とロドニーマクフェイル(生物科学科、パデュー大学)の撮影にライアンManeri(ミヤコドリプロダクション、LLC)に感謝したいと思います。スーターのラボでの研究は、パデュー大学のNIH(R01 NS049233)とBindleyバイオサイエンスセンターからDMSへの補助金によってサポートされています