Антиген презентации во вторичных лимфоидных органах по дендритных клеток имеет решающее значение для инициирования Т-клеток опосредованный адаптивный иммунный ответ. Здесь мы показываем, культуре костного мозга производных мышиных дендритных клеток, активации, и маркировки для 2-фотонного изображения.
Abstract
Существует несколько методов для подготовки мышиных дендритных клеток можно найти в литературе. Здесь мы представляем метод, который производит более 85% CD11c высокой дендритных клеток в культуре, дома дренаж лимфатических узлов после подкожного введения и настоящего антигена антиген специфический Т-клеток (см. видео). Кроме того, мы используем инструменты Эссен Incucyte отслеживать созревание дендритных камеру, где, в день 10, морфология культивируемых клеток характерна для зрелых дендритных клеток и <85% клеток CD11chigh. Изучение презентации антигена в периферических лимфатических узлов на 2-фотонных изображений показал, что Существуют три различных этапа дендритных клеток и Т-клеточного взаимодействия 1, 2. Этап I состоит из краткого серийный контактов между высоко подвижных антиген специфический Т-клеток и антигена проведения дендритные клетки 1, 2. Второй этап характеризуется длительным контактам между антиген-специфических Т-клеток и антигена подшипников дендритные клетки 1, 2. Наконец, фаза III характеризуется Т-клеток, отходящие от дендритных клеток, восстановление подвижности и начинают делить 1, 2. Это один из примеров типа антиген-специфические взаимодействия, которые могут быть проанализированы двухфотонного изображения антиген-загружалась ячейки трекер красителя меченных дендритные клетки.
Protocol
1) Снимите оба бедра кости от одной мыши Используйте рассечение ножницами, чтобы отрезать мышц и подвергать бедренной кости выше и ниже суставов (коленных и тазобедренных). Возьмитесь центр бедренной кости с рассечением пинцет и голову выше и ниже суставов уйти, так как большая час…
Discussion
Дендритные клетки являются ключевыми медиаторами адаптивного иммунного ответа и наиболее эффективным антигенпрезентирующие клетка характеризуется на сегодняшний день. Методы человека и мыши дендритных клеток культуры в литературе различаются по типу цитокинов использовать для влияния на ра?…
Acknowledgements
Национальные институты здоровья Kirchstein стипендий predoctoral общение АИ-64 128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
P. Matheu, M., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging. J. Vis. Exp. (17), e773, doi:10.3791/773 (2008).