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방사성 표지 된 ATP로 단백질 키나아제 활성 측정
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JoVE 杂志 生物化学
Assaying Protein Kinase Activity with Radiolabeled ATP
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방사성 표지 된 ATP로 단백질 키나아제 활성 측정

DOI:
10.3791/55504-v

•

08:05 min

•

May 26, 2017

•

, ,
1Department of Pharmacology,University of Texas Southwestern Medical Center

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:36Kinase Purification Resources and General Immunoprecipitation Pipeline
  • 01:49Kinase Reactions and SDS-PAGE
  • 02:45Gel Staining and Drying
  • 04:18Autoradiogram and Scintillation Counts
  • 05:57Results: Differences in Activity Between ERK2 and ERK2 Mutants
  • 07:02Conclusion

Summary

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단백질 키나아제는 고도의 진화 된 신호 효소 및 세포 내 및 세포 내 신호 전달에 중요한 발판이다. 우리는 세포 표지 조절의 해명에 도움이되는 신뢰할 수있는 방법 인 방사성 표지 된 아데노신 3 인산염 ([γ- 32 P] ATP)의 사용을 통해 키나아제 활성을 측정하기위한 프로토콜을 제시한다.

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Keywords: Protein Kinase ActivityRadiolabeled ATPKinase SignalingKinase AssayCell LysatesProtein A-Sepharose BeadsKinase Reaction BufferSDS-PAGECoomassie StainAutoradiography

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