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Ensayos in Vitro Ubiquitination y Deubiquitination de histonas nucleosomales
JoVE 杂志
生物化学
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JoVE 杂志 生物化学
In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones
DOI:

11:36 min

July 25, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 01:01GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex
  • 02:16Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex
  • 04:58Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells
  • 07:38Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD
  • 09:05Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination
  • 10:40Conclusion

Summary

自动翻译

La ubiquitinación es una modificación post-traduccional que desempeña un papel importante en los procesos celulares y está estrechamente coordinada por la desubiquitinación. Los defectos en ambas reacciones subyacen a patologías humanas. Proporcionamos protocolos para la realización de la ubiquitinación y la reacción de desubiquitinación in vitro utilizando componentes purificados.

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