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Lentiviral Mediated Gene Silencing in Human Pseudoislet Prepared in Low Attachment Plates

Silenciamento gênico mediado por Lentivirus em Pseudoislet humano preparado em placas de baixo acessório

DOI:
10.3791/59578-v

•

11:24 min

•

May 14, 2019

•

, , , , ,
1Department of Internal Medicine, Carver College of Medicine,University of Iowa, 2Fraternal Order of Eagles Diabetes Research Center,University of Iowa, 3Roy J. Carver Department of Biomedical Engineering,University of Iowa

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:42Overnight Culture of Human Islets for Recovery After Shipment
  • 01:32Preparation of Single Cell Suspension from Human Islets
  • 04:03Pseudoislet Formation and Transduction by Lentivirus
  • 08:44Results: Morphological and Functional Studies Using Gene Modified Human Pseudoislets
  • 09:53Conclusion

Summary

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Um protocolo para criar pseudoislets humanos modificados gene das pilhas de ilhotas humanas dispersas que são transados pelo Lentivirus que carreg o RNA curto do hairpin (shRNA) é apresentado. Este protocolo utiliza prontamente-as embarcações disponíveis da enzima e da cultura, podem ser executadas facilmente, e produzem os pseudoislets humanos genetically modificados apropriados para estudos funcionais e morfológicos.

Tags

LentiviralGene SilencingHuman PseudoisletLow Attachment PlatesIslet FunctionGene Expression ModulationSHR8 TransductionProteolytic EnzymeCollagenolytic EnzymeCell DissociationCMRL MediumFetal Bovine Serum

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