De chirurgische procedure voor het induceren van eenzijdige achterbeen ischemie is aangetoond, met bevestiging van ischemie door een laser Doppler perfusie beeldvorming.
In de Verenigde Staten, perifeer arterieel vaatlijden (PAD) treft ongeveer 10 miljoen mensen, en is ook wereldwijd voorkomt. Medische therapieën voor de symptomatische verlichting zijn beperkt. Chirurgische of endovasculaire ingrepen nuttig zijn voor sommige individuen, maar op lange termijn resultaten zijn vaak teleurstellend. Als gevolg hiervan is er behoefte voor het ontwikkelen van nieuwe therapieën om PAD te behandelen. De muizen achterbeen ischemie voorbereiding is een model van de PAD, en is nuttig voor het testen van nieuwe therapieën. In vergelijking met andere modellen van weefsel ischemie, zoals coronaire of cerebrale slagader afbinden, liesslagader ligatie voorziet in een eenvoudiger model van ischemische weefsel. Andere voordelen van dit model zijn het gemak van de toegang tot de femorale slagader en een lage sterfte.
In deze video, tonen we de methodologie voor de muizenmodel van eenzijdige hindimb ischemie. De specifieke materialen en procedures voor het maken en evalueren van het model zal worden beschreven, inclusief de beoordeling van de ledemaat perfusie door een laser Doppler imaging. Dit protocol kan ook worden gebruikt voor de transplantatie en niet-invasieve volgen van cellen, die wordt aangetoond door Huang et al.. 1.
Er zijn een aantal bronnen van variabiliteit te overwegen, terwijl de planning en uitvoering van achterbeen ischemie modellen. Ten eerste kan het niveau van de ischemie variëren afhankelijk van de locatie van de ligatie met betrekking tot die van de zijtakken. Daarom is voor de consistentie van het model, moeten de dieren ondergaan hetzelfde niveau van arteriële ligatie. Een andere bron van variabiliteit in ischemische herstel is gerelateerd aan de leeftijd van de dieren, met de jonge dieren (6-8 weken oud) met een snellere en meer volledige recovery rates dan oudere dieren (8-10 maanden oud), zoals bepaald door hemodynamische (dat wil zeggen Laser Doppler perfusie) of functionele (dwz loopband testen) maatregelen. Voor studies waarin men de beoordeling van een angiogeen agent, kan het de voorkeur om oudere dieren te gebruiken, omdat een groter verschil tussen de groepen kan worden waargenomen met een therapeutische interventie. Omgekeerd, voor studies waarin men de beoordeling van een anti-angiogene factor, kan het de voorkeur aan jongere dieren te gebruiken om effect size 3 te maximaliseren.
Indien correct uitgevoerd, moet er een minimale complicaties zoals bloeden, infectie, of mortaliteit. Als bloeden gebeurt door toevallige verstoring van de lies of andere schepen, matige druk met een steriele katoenen tip applicator of gaas moet worden toegepast op de site van bloeding tot het bloeden stopt. Dieren die tekenen van infectie moeten worden behandeld met anti-infectieuze middelen. Dieren vertonen significant gangreen kan nodig zijn om beeuthanized. Deze complicatie komt vaker voor bij oudere dieren, en in sommige stammen, zoals BALB c-muizen 4. Daarnaast kan het achterbeen ischemie model lichte tot matige pijn. Daarom moet analgetica zoals buprenorfine of carprofen worden toegediend als nodig is voor de behandeling van pijn, volgens de aanbevelingen van de IACUC.
Tot slot hebben we aangetoond een eenvoudige en reproduceerbare methode voor het bestuderen van PAD in een muizenmodel van achterbeen ischemie. Het achterbeen ischemie model met laser Doppler-analyse is een uitstekend systeem voor het bestuderen van vasculaire pathologie en voor de beoordeling van de therapeutische kandidaten.
De auteurs danken Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, en aan de Stanford Small Animal Imaging Core voor technische ondersteuning. De auteurs danken ook AM Bickford, Inc voor ondersteuning van veterinaire apparatuur. Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies voor onderzoek van de National Institutes of Health (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), de Californische tabak Related Disease Research Program van de University of California (15DAT-0257 en 1514RT-0169) , en het California Institute for Regeneratieve Geneeskunde (RS1-00183). NH wordt ondersteund door een beurs van de American Heart Association.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
Electric shaver | Tool | GE | ||
Cautery | Tool | Baxter | ||
Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |