Myogenic 엔지니어링된 조직 구조의 제작
Summary
여기, 우리는 콜라겐 기반 조직 골격 myoblasts를 포함하는 구성의 제조를 보여줍니다. 이러한 3 – D 설계 구조는 조직을 바꾸거나 수리하는 데 사용할 수 있습니다<em> 생체내에</em>. 우리 목적을 위해서도, 우리는 완전한 심장 블록의 수리를 위해 방실 전선관 이러한 디자인이<sup> [1]</sup>.
Abstract
전자 맥박 조정기가있다는 사실에도 불구하고 생명을 구하는 의료 기기, 소아 환자에서 장기적인 성능이 아이의 작은 크기와 자신의 피할 수없는 성장에 의해 부과된 제한 문제 때문에 수 있습니다. 따라서 심장 리듬 장애와 소아 환자를 위해 특별히 설계된 혁신적인 치료법에 대한 진정한 필요가있다. 우리는 그 제안이 들어있는 콜라겐 기반 매트릭스로 구성된 전도성 생물 학적 대체 세포가 더 나은 성장에 적응 반복 수술의 필요성을 절감하며 크게 다음과 환자의 삶의 질을 향상시킬 수 autologously – 파생. 현재 연구에서 우리는 패션에 히드로겔 매트릭스 내에있는 마음의 상단과 하단 회의소 사이 전선관 될 것입니다 수술 – implantable 조직 구조를 기본 골격 myoblast 세포 문화를 통합을위한 절차를 설명합니다. 궁극적으로, 우리는 완전한 심장 블록과 어린이 방실 전기 전도를 복원할 수 있도록 설계 조직의이 유형을 사용하여 기대하고 있습니다. 그런 관점에서, 우리는 신생아 루이스 쥐 및 플레이트 그 규칙을 수정한 버전을 사용 laminin – 코팅 조직 문화 요리에의 골격 근육에서 myoblasts을 분리<sup> [2, 3]</sup>. 1~2일 후, 교양 세포는 항생제로 1을 입력 콜라겐, Matrigel ™, NaHCO를 수집하고 혼합<sub> 3</sub>. 그 결과 거의 모든 모양과 크기의 몰드로 주조 수있는 점성, 균일한 솔루션입니다<sup> [1, 4, 5]</sup>. 우리의 조직 구조에 대한, 우리는 표준 절차를 사용하여 태아의 양고기 피부에서 분리된 제 1 형 콜라겐을 채용<sup> [6]</sup>. 일단 조직이 37 확정했다 ° 구조가 변할 때까지 C는, 문화, 미디어 조심스럽게 판에 추가됩니다. 설계 조직은 다음이 준비되는 시점에서 2 일간 더 탈수를 통해 더욱 응축 수 있습니다<em> 체외에서</em> 평가 또는 외과 – 이식.
Protocol
Discussion
조직 구조가 캐스팅 될있는 금형은 어떤 모양과 크기로 만들 수 있지만, 첨부 파일이 최소한 두 지점이있을 필요합니다. 그렇지 않으면, 매트릭스 및 세포는 구형 구조를 형성하고 세포는 죽지. 현재 프로토콜에서, 우리는이 목적을 위해 폴리에스터 메쉬의 사용을 설명, 아직 우리는 성공적으로 스테인리스 메쉬를 사용했습니다. 물론, 큰 금형보다 세포와 다른 재료의 더 큰 볼륨을 요구할 것…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
, 쓰래서 연구 기금에서 새 연구원 수상하고, 어린이 병원 보스턴에서 심장 전도 기금에 기부,이 작품은 국립 보건원에서 연구 기금 (HL088206 HL068915)에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
Referenzen
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
