Cancer Borealis stomatogastrischen Nervous System Dissection
Summary
Die stomatogastrischen Nervensystems (Tln) des Jonah Krabbe (<em> C. borealis</em>) Kann für die Elektrophysiologie, Immunhistochemie und Zellkultur-Studien verwendet werden. Die Tln-Extraktion ist in zwei Teile gemacht: die Brutto-und feinen Sezierung.
Abstract
Die stomatogastrischen Ganglion (STG) ist ein ausgezeichnetes Modell für die Untersuchung zellulärer und Netzwerk-Interaktionen, da es eine relativ kleine Anzahl von Zellen (ca. 25 in C. borealis), die gut charakterisiert sind enthalten. Die Zellen in der STG zeigen eine breite Palette an Ausgängen und sind verantwortlich für die motorische Handlungen des Magens. Der Magen enthält die Magenmühle die bricht Essen mit drei internen Zähnen und dem Pylorus, die das Lebensmittel-Filter, bevor sie den Mitteldarm erreicht. Die STG stellt zwei rhythmische Ausgänge zu den Magenmühle und Pylorus als central pattern generators (CPG) bekannt zu kontrollieren. Jede Zelle in der STG kann in einem oder beiden dieser Rhythmen zu beteiligen. Diese Leitlinien erlauben für das Studium der Neuromodulation, Homöostase, Mobilfunk-und Netzwerk-Variabilität, Netzwerk-Entwicklung sowie Netzwerk Erholung.
Die Zerlegung der stomatogastrischen Nervensystems (Tln) aus dem Jonah Krabbe (Cancer borealis) ist in zwei Teile gemacht, die grobe und feine Dissektion. In der Brutto-Dissektion der gesamten Magen ist von der Krabbe seziert. Während der feinen Sezierung der Tln wird aus dem Magen mit einem Dissektionsmikroskop und Mikro-Dissektion-Tools (siehe Abbildung 1) extrahiert. Die Tln umfasst die STG, die ösophageale Ganglion (OG) und die kommissuralen Ganglien (CoG) sowie die Nerven, die die Bauchmuskulatur innervieren. Hier zeigen wir, wie eine komplette Zerlegung der Tln in Vorbereitung für eine elektrophysiologische Experiment, bei dem die Zellen in der STG von intrazellulär und der peripheren Nerven erfasst werden durchführen würde für extrazelluläre Ableitungen verwendet werden. Die richtige Technik für das Finden der gewünschten Nerven sowie unsere Technik der desheathing das Ganglion der Somata und Neuropil offenbaren gezeigt.
Protocol
Discussion
Die Tln Dissektion ist der erste Schritt in der Durchführung einer elektrophysiologischen oder Immunhistochemie Experiment, oder zur Gewinnung von Zellen für die Zellkultur. Unabhängig von der beabsichtigten Experiment werden die Brutto-Dissektion bleiben unverändert. Allerdings können die feinen Sezierung variieren. Es ist wichtig, vor der Zeit, die Zellen und die Nerven Sie von Datensatz planen. Die meisten Neuronen in der STG haben Prozesse, die mindestens einen Muskel innervieren in den Magen (siehe Abbildung 2…
Acknowledgements
Wir danken den Mitgliedern der Marder Lab. Wir danken unseren Berater, Dr. Eva Marder, für ihre Unterstützung und Ermutigung. Diese Arbeit wurde vom National Institute of Neurological Disorders and Stroke Grants NS-17813 und NS-058110 gefördert.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Black Sylgard 170 | Andere | Dow Corning | 170 | Gross Dissection |
| Fine Scissors | Surgery | FST | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Surgery | FST | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | Surgery | FST | 14110-17 | |
| Micro-Spatula | Surgery | Ward Sci. | 15 V 4313 | |
| Rongeurs | Surgery | FST | 16000-14 | |
| Tissue Forceps | Surgery | FST | 11021-12 | |
| Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Surgery | California Fine Wire | Fine Dissection | |
| Forceps #5 | Surgery | FST | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Surgery | FST | 26002-10 | |
| Moria Spring Scissors (7mm blades) | Surgery | FST | 15370-52 | |
| Petri Dish (100x15mm) | Andere | Fischer | 08-757-12 | |
| Pin Holder | Surgery | FST | 26018-17 | |
| Super fine forceps #5SF | Surgery | FST | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Andere | Dow Corning | 182 | |
| Tungsten Needles | Surgery | FST | 10130-05 | |
| Dissecting Microscope | Microscope | Wild | MC3 | Misc. |
| Jonah Crab (C. borealis) | Animal | Commercial Lobster |
Referenzen
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. . Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).
- Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network. Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).
