Otomatik Proteomik İşleme Dijital Mikroakiskan

Summary

Elektrik alanların uygulama tarafından bir dizi elektrot – Dijital Mikroakiskan ayrık damlacıklar (ml ~ nL) manipülasyon ile karakterize bir tekniktir. Hızlı, sıralı, minyatür otomatik biyokimya testleri yürütmek için çok uygundur. Burada, birkaç proteomik işlem adımlarını otomatik olarak yetenekli bir platform raporu.

Abstract

Klinik proteomik, hastalığın erken tanı ve prognoz için yararlı olacaktır biyobelirteç keşif umut verici, yeni ve önemli bir disiplin olarak ortaya çıkmıştır. Klinik proteomik yöntemleri çok çeşitlilik gösterirken, bir ortak özelliği son derece heterojen sıvıları (örneğin, serum, kan, vs) ve analizden önce, (ii) geniş biyokimyasal işlem proteinlerin ekstraksiyonu (i) ihtiyaç vardır. Burada, klinik proteomik kullanılan birçok işlem adımı birleştirerek yeni bir dijital Mikroakiskan (DMF) tabanlı yöntemi raporu. Bu, protein ekstraksiyon, resolubilization, azaltma, alkilleme ve enzimatik sindirim içerir. Dijital Mikroakiskan nanoliter mikrolitrelik ölçekli damlacıkları açık bir yüzey üzerine manipüle edildiği bir microscale sıvı-işleme tekniği. Damlacıkları dielektrik tabakası ile kaplı elektrotlar bir dizinin üstüne konumlandırılmış bir elektrik potansiyeli damlacık uygulandığında, masraflar dielektrik her iki tarafında birikir. Suçlamalar damlacık konumunu kontrol etmek için kullanılan elektrostatik kolları olarak hizmet ve seri bir dizi elektrot kutuplama damlacıkları dağıtmak, hareket, birleştirme, mix ve yüzey üzerinde bölünmüş yapılabilir. Bu nedenle, DMF, hızlı, sıralı, çok adımlı, minyatür otomatik biyokimya testleri taşımak için, doğal bir uyum. Bu, geleneksel yöntemler (elle pipetleme veya robotlar dayanarak) üzerinde önemli bir ilerlemeyi temsil eder ve klinik proteomik yararlı bir yeni bir araç olma potansiyeline sahiptir.

Mais J. Jebrail, Vivienne N. Luk, ve Steve CC Shih, bu çalışmaya eşit katkıda bulundu.

Sergio LS Freire mevcut adresi 600 Güney 43rd Street, Philadelphia, PA 19.104 bulunan Philadelphia Bilimler Üniversitesi.

Protocol

Bölüm 1: Cihaz Fabrikasyon Piranha çözüm temiz bir cam yüzeyler (3:1 kons sülfürik asit:% 30 hidrojen peroksit). Piranha çözümü için sık sık ajitasyon ile 10 dakika Yüzeyin bırakın. Deiyonize (DI) su ile durulama ve N 2 gazı ile substratlar kurutma sonra, elektron ışını odasının içine, krom birikimi (250 nm kalınlığı) substratları yerleştirin . Krom kaplı substrat kurutmak için, sonra 115, 5 dakika sıcak bir plaka üzerinde fırında isopropano…

Discussion

Proteomik standart numune alma ve işleme eksikliği alan için önemli bir sınırlama yoktur. Buna ek olarak, geleneksel macroscale numune alma, örnek kaybı ve kirlenmeye yol açabilecek birden fazla kaplar ve çözüm transferleri içerir. Bu sorunlara olası bir çözüm, dijital ^{Mikroakiskan 1} (DMF) dayanarak örnek işleme için entegre sistemler oluşturmaktır . Önceki çalışmada, DMF heterojen istenmeyen kirleticiler verimli çıkarılması protein içeren solüsyonlar için yararlı olduğu gö…