Emerald Kül Freze Gen İfade Analizi ( Agrilus planipennis) Kullanarak Kantitatif Real Time PCR
Summary
Kantitatif gerçek zamanlı PCR (QRT PCR) mRNA düzeyleri farklı böcek doku ve gelişim evreleri teşhis etmek için etkili bir araçtır. Bu yazıda farklı larva dokularında tespit mRNA düzeyleri ve istilacı böcek türlerinin, zümrüt kül delici gelişim evreleri QRT-PCR kullanımı göstermektedir.
Abstract
Emerald kül delici (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>), Dişbudak ağaçları, milyonlarca öldürdü egzotik bir invaziv haşere, (<em> Fraxinus</em> Spp.) Kuzey Amerika.<strong></strong> EAB hızla yayılmaya devam ediyor ve saldırılar olgun ağaçların fidan, farklı yaşlardaki ağaçların dişbudak. Ancak, çok az bir tarih ya da herhangi bir moleküler bilgi EAB var. Biz doku düzeyinde moleküler tabanlı fizyolojik süreçleri deşifre ilgilenen dişbudak ağaçları başarılı kolonizasyon yardım EAB. Bu yazıda tespit mRNA düzeyleri farklı larva dokular (midgut, yağ organları ve manikür de dahil olmak üzere) ve farklı gelişim evreleri (1 de dahil olmak üzere etkin kullanımı kantitatif gerçek zamanlı PCR (QRT PCR)<sup> St</sup> – 2<sup> Nd</sup> – 3<sup> Rd</sup> – 4<sup> Th</supEAB> instars, prepupae ve yetişkinler). Bir örnek olarak, bir peritrophin geni (burada adında,<em> AP-PERI1</em>), Ilgi gen ve ribozomal protein (örneğinde<em> AP-RP1</em>), Iç kontrol olarak. Peritrophins böcek bağırsak astar peritrophic membran / matris (PM), önemli bileşenleridir. PM midgut epitel sindirim ve mekanik koruma da dahil olmak üzere çeşitli fonksiyonları vardır.
Protocol
Discussion
Eşik döngüleri (Ct) değeri, QRT-PCR plaka her bir numune için elde edilir. Standart eğri yapmak için, her bir dilüsyon için elde Ct değeri, onun konsantrasyonu günlük karşı çizildi. Deney numuneleri için Ct değerlerini daha sonra bu seyreltme serisi standart eğrisi üzerine çizilen. Hedef miktarları, her deney yani doku ve gelişim ifade için ayrı bir standart eğrileri hesaplandı. Göreceli ifade değerleri (devir), daha sonra iç kontrol için elde edilen miktar (AP-RP1) ile ilgi hedef …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz deneylerin kurulum, Lourdes Delta Arrueta Antequera (Entomoloji Bölümü, Ohio State Üniversitesi / OARDC, Wooster, OH) tarafından sağlanan yardım kabul etmiş sayılırsınız. Dr Therese Polonya (USDA, Orman Hizmetleri, NRS) EAB larva örnekleri göndermek için teşekkür ederim. Yardım mikroskop kurulum takdir Dr. Luis Canas ve Nuriş M Acosta tarafından sağlanan. Ohio Tarımsal Araştırma ve Geliştirme Merkezi, Ohio State Üniversitesi tahsis Eyalet ve Federal fonları tarafından bu proje için finansman sağlanmıştır.
Referenzen
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say]. Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).
- Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol. 39, 403-413 (2009).
- Pfaffl, W. M. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).
- Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. . Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).
