Использование тонких кончика микропипетки мы вводим плазмиды ДНК в подобластях куриного сомитов или нервных трубок. Концентрация плазмиды регулируется для получения одного трансфекции клеток. Затем мы позволить клеткам развиваться в клональных популяций.
Abstract
Центральной темой в биологии развития, является диверсификация линий и выяснение основных молекулярных механизмов. Это влечет за собой тщательный анализ судьбы отдельных клеток в норме и при экспериментальных условиях. С этой целью трансфекции методы, ориентированные одного прародителями являются необходимым условием. Мы описываем здесь технически простой метод трансфекции клеток в одной куриной ткани-ово, позволяя надежной линии трассировки, а также генетических манипуляций. Конкретные области ткани направлены в сегмент или нервной трубки, и ДНК вводится непосредственно в эпителии интерес, в результате спорадических трансфекции отдельных клеток. Использование репортеров, клональной населению, могут, следовательно, быть прослежены на срок до трех дней, и поведение генетически модифицированных клональной популяции могут быть по сравнению с контролем. Этот метод использует преимущества доступности куриного эмбриона, а также новые инструменты для генетических манипуляций. Мы сравниваем и обсудить его преимущества по сравнению с широко используемым методом электропорации, и возможные применения и использования в дополнительной в естественных условиях модели также предложил. Мы выступаем за использование этого метода, как существенное дополнение и дополнить существующие линии отслеживания и генетических инструментов вмешательства.
Protocol
1. Подготовка Микропипетки Тянем наш пипетки на стандартном Narishige PP-83 пипетки съемник с тепловой установки 13.5. Точная установка должна быть откалибрована, направленных на диаметр кончика пипетки от 8 до 10 мкм. Мы используем нити содержащих боросиликатного стеклянные труб?…
Discussion
Описанный выше метод является модификацией ранее описанной техники для доставки липофильных красителей малого подмножества клеток или одной прародителей 3. Она имеет три основных преимущества по сравнению со стандартной техникой электропорации. Во-первых, она предоставляет ср…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Шломи Криспин для нейронных ЭОП. В частности, мы признаем, Юваль Корица для начала технику GFP трансфекции. Эта работа была поддержана грантами от Израиля научного фонда, ассоциации Francaise контр ле Миопатии и Deutche Forschungsgemeinshaft, совместные научно-исследовательский центр 488 до CK