Toll-like reseptör Etkinleştirme Düzenlenmesi Neu1 Sialidase Faaliyet Algılama
Summary
Sialidase testi canlı makrofaj hücre yüzeyinde reseptör düzeyinde iltihabi hastalıklar mikrobik enfeksiyonlar ve katılımı TLR sensörleri yeni moleküler mekanizma (lar) aydınlatmak basit bir teknik yaklaşım.
Abstract
Memeli Toll-like reseptörler (TLR), patojen ilişkili moleküler desenleri tanımaya reseptörlerinin bir aile. Sadece TLR mikrobiyal önemli sensörler (örneğin, virüs, bakteri ve parazit) enfeksiyonları, onlar da muhtemelen otoimmün hastalıklar, bulaşıcı hastalıklar, enfeksiyon hastalıkları, patofizyolojisinde önemli bir rol oynamaktadır. Böylece, şiddeti ve süresi, bulaşıcı hastalıklara karşı TLR tepkilerin sıkı kontrol edilmelidir. Bu sensör reseptörler, ligand etkileşimleri ve sinyal bileşenleri yapısal bütünlüğünü anlamak sonraki immünolojik korunması için gerekli olduğunu izler. Ayrıca sensör manipülasyon yoluyla hastalık modifikasyonu için önemli fırsatlar sağlayacaktır. TLR sensörleri sinyal yolakları iyi karakterize olmasına rağmen, parametreler sensörleri ve ligandlar hala yetersiz tanımlanmış kalır arasındaki etkileşimleri kontrol. Biz son zamanlarda, daha önce 1,2 görülmemiştir, doğal ligand TLR aktivasyonu yeni bir mekanizma tespit ettik. Bu ligand bağlı TLR aktivasyon Neu1 sialidase aktivasyonu ile sıkıca kontrol edildiğini göstermektedir. Ayrıca Neu1 sıkıca Neu1 ve matriks metalloproteinaz-9 (MMP-9) reseptörleri 4 karmaşık çapraz konuşma içeren TrkA ve TrkB 3 gibi nörotrofin reseptörleri düzenleyen bildirdin. Sialidase tahlil başlangıçta GPCR Gαi proteinleri ve MMP-9 5 üzerinden makrofajlar, dendritik hücreler ve fibroblast hücreleri hücre yüzeyinde Neu4 sialidase aktivasyonu, bir roman ligand, thymoquinone bulmak için kullanabileceğiniz olmuştur. TLR reseptörleri için, bizim veri Neu1 sialidase zaten, TLR-2, -3 ve -4 reseptörleri ile kompleks ve iki reseptör bağlayıcı ligand üzerine indüklenir göstermektedir. Aktive Neu1 sialidase hidroliz sialyl α-2 TLR-4 dimerization, MyD88/TLR4 karmaşık işe alım, NFkB aktivasyonu ve pro-inflamatuar hücre yanıtlarını sterik hinderance kaldırmak için bağlayıcı ligand uzak ,3-bağlantılı β-galactosyl artıkları. Ortak bir raporda, Neu1 sialidase 6 makrofaj hücreleri fagositoz düzenleyen gösterilmiştir. Birlikte ele alındığında, sialidase testi ligand bağlı reseptör aktivasyonu moleküler mekanizmaları güçlü yorumlarla bize sağlamıştır. Neu1 sialidase ve TLR aktivasyonu arasında kesin bir ilişki, Trk reseptörlerinin henüz tam olarak açıklanamamış olmasına rağmen, hücre düzenleme yollar öncü ya da yeni bir yaklaşımı temsil eder.
Protocol
Discussion
Canlı makrofaj hücreleri 2 sialidase faaliyet algılamak için yeni geliştirilen testi kullanılarak, BMC-2 de canlı doza bağlı olarak makrofaj hücreleri DC-2.4 dendritik hücreler canlı ligand bağlı sialidase faaliyet sialidase aktivite tespit etmek için bu teknolojiyi kullandı HEK-TLR4/MD2, HEK293 SP1 meme adenokarsinom hücreleri, insan WT ve 1140F01 ve WG0544 tip I sialidosis fibroblast hücreleri. Tamiflu gibi nöraminidaz inhibitörleri (oseltamivir fosfat) bir IC 50 0,0194 mcM BM…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MRS hibe Kısmi destek Doğa Bilimleri ve Mühendisliği Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada, Nöroloji Araştırma, ARC Harry Botterell Vakfı ve Garfield Kara Kardiyovasküler Araştırma ve Geliştirme Fonu. SRA Kraliçe Üniversitesi Araştırma Ödülü ve Robert J. Wilson Bursu bir alıcı. PJ Kraliçe Lisansüstü Ödülü ve Robert J. Wilson Bursu, bir alıcı. AG ve SA Kraliçe Lisansüstü Ödülü alıcıları. SF Bilim ve Teknoloji (OGSST) Ontario Yüksek Lisans Bursu layık görüldü. AG Kraliçe Franklin Bracken Lisansüstü Bursu almıştır. SA Kraliçe RS McLaughlin Yüksek Lisans Bursu almıştır.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
Referenzen
- Amith, S. R. Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling. Cell Signal. 22, 314-324 (2010).
- Amith, S. R. Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase. Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).
- Woronowicz, A. Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase. Glycobiology. 17, 10-24 (2007).
- Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling. Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).
- Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR Gαi proteins and matrix metalloproteinase-9. Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).
- Seyrantepe, V. Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1. Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).
