الخلية الأولية من الثقافات ذبابة الفاكهة الأجنة المعيدة
Summary
ونحن نقدم لإعداد بروتوكول مفصلة الخلايا الأولية فصلها عن<em> Drosophil</em> A الأجنة. فإن القدرة على تنفيذ اضطراب رني فعالة ، جنبا إلى جنب مع غيرها من أساليب التصوير الجزيئي والكيمياء الحيوية ، والخلايا يسمح بالتصدي لمجموعة متنوعة من الأسئلة في<em> ذبابة الفاكهة</em> الخلايا الأولية.
Abstract
نحن هنا تصف طريقة لإعداد وزراعة الخلايا الأولية من أجنة فصل المعيدة ذبابة الفاكهة. وتجمع في سطور ، وكمية كبيرة من الأجنة من الذباب ونظم الشباب وصحية ، وتعقيمها ، ثم فصلها ماديا في تعليق خلية واحدة باستخدام الخالط الزجاج. بعد أن مطلية على لوحات أو الثقافة أو الشرائح غرفة في كثافة متوسطة المناسبة في الثقافة ، ويمكن تمييز هذه الخلايا الى مزيد من عدة أنواع الخلايا شكليا ، متميزة ، والتي يمكن تحديدها بواسطة علامات على خلايا محددة. وعلاوة على ذلك ، فإننا نقدم لمعالجة ظروف هذه الخلايا مع مضاعفة الرناوات (DS) الذين تقطعت بهم السبل للحصول ضربة قاضية الجينات. ويتم إنجاز رني كفاءة في خلايا ذبابة الفاكهة الابتدائي بحلول الاستحمام ببساطة الخلايا في مستنبت المحتوية على الرنا المزدوج الجديلة. القدرة على القيام بأنشطة فعالة رني اضطراب ، جنبا إلى جنب مع غيرها ، والكيمياء الحيوية الجزيئية وتحليل التصوير الخلية ، وسوف يسمح للإجابة عن أسئلة متنوعة من ذبابة الفاكهة في الخلايا الأولية ، وخصوصا تلك التي تتصل العضلات متباينة ، والخلايا العصبية.
Protocol
Discussion
يمكن للنمط التنموية الثقافات الرئيسي للخلايا ذبابة الفاكهة تختلف اختلافا كبيرا ، ربما يعود ذلك الى العديد من المتغيرات أثناء عملية التحضير الخلية الأولية. ينبغي أولا وقبل كل شيء يطير المستخدمة لوضع البيض يكون الشباب (في غضون أسبوع من العمر) والصحية (خالية من عد?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
كان مدعوما من قبل JB ديمون رونيون زمالة مؤسسة أبحاث السرطان DRG – 1716-1702. وأيد JZ المعاهد الوطنية للصحة / NIGMS زمالة GM082174 F32 – 02. NP هو محقق من معهد هوارد هيوز الطبي.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Shields and Sang M3 medium | Sigma | S3652 | ||
| Fetal bovine serum | JRH Biosciences | 12103-500M | ||
| Insulin from bovine pancreas | Sigma | I-6634 | ||
| Large embryo collection cages | Genesee Scientific | 59-101 | ||
| #25 US standard testing sieve | VWR | 57334-454 | ||
| #45 US standard testing sieve | VWR | 57334-462 | ||
| #120 US standard testing sieve | VWR | 57334-474 | ||
| Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL | VWR | 62400-620 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0040 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0100 | ||
| Costar, 384-well plate | VWR | 29444-078 | ||
| Lab-Tek II Chambered coverglass | Fisher Scientific | 171080 |
Referenzen
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. . Laboratory culture of Drosophila. , 588-599 (1999).
- Bai, J., Hartwig, J. H., Perrimon, N. S. A. L. S. a WH2-domain-containing protein, promotes sarcomeric actin filament elongation from pointed ends during Drosophila muscle growth. Dev. Cell. 13, 828-842 (2007).
- Bai, J. RNA interference screening in Drosophila primary cells for genes involved in muscle assembly and maintenance . Development. 135, 1439-1449 (2008).
- Sepp, K. J. Identification of neural outgrowth genes using genome-wide RNAi. PloS. Genet. 4, e1000111-e1000111 (2008).
- Donady, J. J., Fyrberg, E. Mass culturing of Drosophila embryonic cells in vitro. TCA Manual. 3, 685-687 (1977).
- Seecof, R. L., Alleaume, N., Teplitz, R. L., Gerson, I. Differentiation of neurons and myocytes in cell cultures made from Drosophila gastrulae. Exp. Cell Res. 69, 161-173 (1971).
- Bai, J., Sepp, K. J., Perrimon, N. Culture of Drosophila primary cells dissociated from gastrula embryos and their use in RNAi screening. Nature Protocols. 4, 1502-1512 (2009).
