Identificazione dei meccanismi alla base danno muscolare è cruciale. Qui vi presentiamo la tecnica istologica per la preparazione inclusi in paraffina e congelati sezioni dei muscoli toracici Drosophila. Questo permette l'analisi della morfologia muscolare e la localizzazione di proteine e altri componenti delle cellule muscolari.
La caratterizzazione molecolare delle distrofie muscolari e miopatie nell'uomo non hanno rivelato la complessità della malattia muscolare e l'analisi genetica di specifica dei muscoli, la formazione e la funzione in sistemi modello ha fornito informazioni preziose in fisiologia muscolare. Pertanto, l'individuazione e la caratterizzazione dei meccanismi molecolari che sono alla base danno muscolare è critica. La struttura di adulti Drosophila multi-fibra muscolare assomigliano vertebrati muscoli striati 1 e la trattabilità genetica della Drosophila ha fatto un grande sistema per analizzare la morfologia distrofica muscolare e caratterizzano i processi che interessano la funzione muscolare in età adulta vola 2. Qui vi presentiamo la tecnica istologica per la preparazione inclusi in paraffina e congelati sezioni dei muscoli toracici Drosophila. Queste preparazioni consentono di tessuto da macchie colorate con classica istologici ed etichettato con coloranti proteine rilevazione, e in particolare criosezioni sono ideali per la rilevazione immunoistochimica di proteine nei muscoli intatti. Questo permette di analisi della struttura del tessuto muscolare, l'identificazione di difetti morfologici e la rilevazione dei pattern di espressione per il muscolo / neuroni specifici per le proteine nei muscoli adulti Drosophila. Queste tecniche possono anche essere leggermente modificato per il sezionamento di altre parti del corpo.
The authors have nothing to disclose.
Ringraziamo il Prof. Eichele per averci permesso di usare il crio-microtomo. Il lavoro è stato finanziato dal Max-Planck-Gesselschaft.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
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Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |