يوصف بروتوكول الأمثل لعزل الخلايا الجذعية من الغدة اللعابية الماوس. الأسلوب يعمل الهضم الأنزيمي والميكانيكية ، وتراخيص من العزلة salispheres تحتوي على خلايا ذات خصائص الخلايا الجذعية.
الغدد اللعابية ناضجة سواء كانت ذات منشأ الإنسان والفأر تشمل الحد الأدنى من أنواع الخلايا الخمس ، كل واحد مما يسهل على إنتاج وإفراز اللعاب في الفم. خلايا عنيبية المصلية والمخاطية هي البروتين والأغشية المخاطية المصانع المنتجة للغدة على التوالي ، وتمثل مصدر إنتاج اللعاب. توليفها مرة واحدة ، تفرز مختلف المكونات البروتينية الأنزيمية وغيرها من اللعاب من خلال سلسلة من الخلايا الظهارية الأقنية التي تحمل نوع التشكل ، وحتى الطرد النهائي للعاب من خلال واحدة القناة الرئيسية في تجويف الفم. كما تم تعديل تركيبة اللعاب من قبل خلايا الأقنية خلال هذه العملية.
في مظهر من مظاهر الأمراض مثل متلازمة سجوجرن ، وفي بعض الحالات السريرية مثل العلاج الإشعاعي لسرطان الرأس والعنق ، وإفراز اللعاب من الغدد تنخفض بشكل كبير 1،2. وجفاف الفم الناتجة عن ذلك ، شعور ذاتي من جفاف الفم ، لا يؤثر فقط على قدرة المريض على البلع والكلام ، ولكنها تشجع أيضا على تطوير وتسوس الأسنان يمكن أن يضعف اجتماعيا لالمتألم.
إعادة إنتاج اللعاب في الظروف المذكورة أعلاه السريرية يمثل بالتالي لم تلب الحاجة الطبية ، وكما العديد من الدراسات أظهرت هذه القدرة على التجدد في الغدد اللعابية 3-5. مزيد من عزلة السكان تشبه الخلايا الجذعية من خلايا الأنسجة المختلفة من خلال الماوس وهيئات حقوق الإنسان 6-8 ، لقد أظهرنا باستخدام الطريقة الموصوفة التي يمكن أن تستخدم الخلايا الجذعية المعزولة من الغدد اللعابية الماوس لانقاذ إنتاج اللعاب في اللعاب المشع الغدد 9،10. هذا الاكتشاف يمهد الطريق لتطوير علاجات الخلايا الجذعية مقرها لمعالجة الأوضاع xerostomic في البشر ، وأيضا لاستكشاف الغدة اللعابية المكروية باعتبارها تحتوي على خلايا ذات القدرات الذاتية multipotent تجديد.
وصف طريقة زراعة الأنسجة هنا يمثل بروتوكول استنساخه لعزل الخلايا الجذعية التي تحتوي على salispheres من الغدد اللعابية من الفئران. وقد أبرزت الدراسات التي تستخدم الخلايا المعزولة في هذه الطريقة القدرة على التجدد اللعابية الخلايا الجذعية الغدة 9. يسببها زرع الخلايا 100 + ج كيت المستمدة من salispheres الانتعاش وظيفية من الغدد اللعابية الماوس المشع. هذه البيانات هي مثيرة وتوفير نقطة انطلاق للتحقيق في الخلايا الجذعية العلاج استنادا لجفاف الفم. لا تزال العديد من السبل التي ينبغي استكشافها ولكن ، بما في ذلك التعريف الكامل التعبير علامة البروتين من الخلايا الجذعية ، وقدرة الغدد تحت الفك السفلي لانقاذ وظيفة الغدد اللعابية النكفية المشع ، والعكس بالعكس ، وتوصيف المفترضة في الخلية الجذعية المتخصصة في الجسم الحي الخلايا. في نهاية المطاف ، وترجمة هذا البروتوكول لعينات الأنسجة البشرية والإمكانات اللاحقة لعلاج جفاف الفم في المرضى من البشر باستخدام خلايا معزولة هو التطبيق الأكثر إثارة للطريقة وصفها.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |