الكشف عن بالمرصاد PCR المفطورة كيت يستخدم تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ، التي أنشئت بوصفها الأسلوب المفضل لأعلى حساسية في الكشف عن التلوث المفطورة ، Acholeplasma والميورة في الثقافات الأخرى وخلية خلية ثقافة تستمد البيولوجية.
صيانة خطوط الخلية خالية من التلوث أمر أساسي لخلية القاعدة البحثية. من بين المخاوف أكبر ملوث وتلوث ميكوبلازما. تباطأ انتشار الأسلحة النووية وعلى الرغم من الانحرافات الكروموسومية ميكوبلازما لا تقتل الخلايا الملوثة عادة ، هم من الصعب كشف ويمكن أن تسبب مجموعة متنوعة من الآثار على الخلايا المستزرعة ، بما في ذلك عملية الأيض تتغير. باختصار ، وتلوث ميكوبلازما التنازلات قيمة هذه خطوط الخلايا في توفير البيانات الدقيقة للبحوث علوم الحياة.
مصادر التلوث الميكوبلازما في المختبر هي صعبة للغاية للسيطرة تماما. كما تم العثور على أنواع معينة ميكوبلازما على جلد الإنسان ، ويمكن من خلال تقنية تعرفوا العقيم الفقراء. بالإضافة إلى ذلك ، فإنها يمكن أن تأتي من مكملات الملوثة مثل مصل بقري جنيني ، والأهم من غيرها من الثقافات الخلية الملوثة. مرة واحدة ميكوبلازما يلوث ثقافة ، فإنه يمكن أن تنتشر بسرعة لتلويث مناطق أخرى من المختبر. الالتزام الصارم الممارسات المختبرية الجيدة ، مثل تقنية العقيم الجيدة هي المفتاح ، وينصح بشدة الفحص الروتيني للميكوبلازما للنجاح في مراقبة التلوث ميكوبلازما.
أصبح PCR المستندة الكشف عن الميكوبلازما وسيلة شعبية جدا لصيانة روتينية خلية الخط. طرق الكشف PCR المستندة حساسة للغاية ويمكن أن تقدم نتائج سريعة ، والذي يسمح للباحثين على الاستجابة بسرعة للقضاء على التلوث وعزل حال اكتشافه بالمقارنة مع الوقت المطلوب باستخدام التقنيات الميكروبيولوجية. الكشف عن بالمرصاد PCR المفطورة كيت حساس للغاية ، مع حد الكشف عن الجينوم سوى 2 في ميكرولتر. الاستفادة من البلمرة Jumpstart من الحمض النووي طق محددة للغاية والتصميم التمهيدي الملكية ، وتقلص إلى حد كبير ايجابيات كاذبة. ومريحة 8 أنبوب تنسيق ، والشرائط قبل المغلفة مع dNTPs والاشعال المرتبطة يساعد على زيادة الإنتاجية لتلبية احتياجات العملاء بشكل اكبر مع مجموعات من خطوط الخلايا.
نظرا للحساسية البالغة للمجموعة ، يجب توخي الحذر الشديد لمنع التلوث غير المتعمدة من العينات والكواشف. البروتوكول خطوة بخطوة نظهر يسلط الضوء على الممارسات والاحتياطات اللازمة للكشف عن ميكوبلازما موثوق بها. نحن أيضا إظهار ومناقشة نتائج نموذجية وتفسيرها. هدفنا هو التأكد من نجاح الباحثين باستخدام الكشف بالمرصاد PCR المفطورة كيت.
وبسبب الحساسية المفرطة من المجموعة ، وعندما يقوم بشكل صحيح يجب أن تسفر عن نتائج محددة عدة تشير إلى أم لا فقد عينتك ميكوبلازما التلوث. وقد الأمثل للاستخدام مع طقم البلمرة Jumpstart من الحمض النووي طق. ويمكن استخدام taqs الأخرى عند إعداد العينات ولكن الرقابة الداخلية في الفرقة 481 الغليان يجب أن تكون موجودة تشير إلى حساسية السليم للطق البديلة. فمن الممكن لنطاقات ايجابية لمعرض كثافات مختلفة تبعا لمستوى التلوث. فمن الممكن أن نلاحظ غياب الفرقة الرقابة الداخلية على عينات ملوثة بشدة. الحذر واستخدام الأسلوب السليم عند إعداد عينات لمنع التلوث وحاسمة لالمناسبة. كشف عند استخدام الكشف بالمرصاد PCR المفطورة كيت.
The authors have nothing to disclose.
بتمويل من سيغما الدريخ
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |