L'utilisation abordable tableaux LED pour photo-stimulation des neurones
Summary
Adulte-né neurones exprimant CHR2 peuvent être manipulés dans des préparations tranche électrophysiologiques afin d'examiner leur contribution à la fonction de olfactive circuits neuronaux.
Abstract
Électrophysiologie tranche standard a permis aux chercheurs de sonder les composantes individuelles des circuits neuronaux par l'enregistrement des réponses électriques des cellules individuelles en réponse à des manipulations électriques 1,2 ou pharmacologiques. Avec l'invention de méthodes pour le contrôle des neurones génétiquement optiquement ciblées (optogénétique), les chercheurs ont désormais un niveau sans précédent de contrôle sur des groupes spécifiques de neurones dans la préparation tranche standard. En particulier, photosensibles channelrhodopsin-2 (CHR2) permet aux chercheurs d'activer des neurones avec 3,4 lumière. En combinant l'étalonnage minutieux des LED à base de photostimulation CHR2 à l'électrophysiologie tranche de la norme, nous sommes en mesure de sonder avec plus de détails sur le rôle de l'adulte-né interneurones dans le bulbe olfactif, premier relais central du système olfactif. En utilisant l'expression virale des CHR2-YFP spécifiquement chez l'adulte-né neurones, nous pouvons contrôler sélectivement les jeunes adultes-né des neurones dans un milieu d'une ancienneneurones d matures. Notre contrôle optique utilise un système simple et peu coûteux à LED, et nous montrons comment ce système peut être calibré pour bien comprendre comment la lumière est nécessaire pour évoquer l'activité de dopage dans les neurones unique. Ainsi, de brefs éclairs de lumière bleue peut contrôler à distance le modèle tirs de CHR2-cellules transduites nouveau-né.
Protocol
Discussion
Ces dernières années ont vu une explosion de la popularité des outils de recherche en neurosciences pour optogénétique 6. En conséquence, il est plus important d'abaisser la barrière d'entrée pour les laboratoires qui désirent commencer à utiliser ces nouveaux outils. Nous décrivons ici comment procéder à une rénovation simple et peu coûteuse et l'étalonnage d'un classique de patch-clamp banc afin qu'il puisse faire plein champ stimulation optique de channelrhodopsin exprim…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la compagnie d'assurance vie "AG2R-La Mondiale-", l'Ecole des Neurosciences de Paris (ENP), l'Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004" dans le cadre de «ERA-NET NEURON »du FP7 programme par la Commission européenne et la Fondation Pasteur. Sébastien Wagner a été soutenu par la Fondation Letten.
Materials
| Material | Typ | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
| Xylazine | 2% | Rompun | |
| NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
| Glucose | Sigma | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma | C7902 | |
| Agarose | Sigma | A9539 | |
| Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
| Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
| LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
| Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
| Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Vibratome | Leica | VT1200S |
Referenzen
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