Intralymphatique Immunothérapie et vaccination chez la souris
Summary
La vaccination prophylactique et thérapeutique échoue souvent pour stimuler une forte réponse immunitaire due à la semaine drainage du vaccin vers les ganglions lymphatiques et par conséquent faible implication des cellules immunitaires. Par injection directe de vaccin vers les ganglions lymphatiques, dite injection intralymphatique, l'efficacité du vaccin peut être fortement améliorée, et les doses de vaccin peut être réduite.
Abstract
Les vaccins sont typiquement injectés par voie intramusculaire ou sous-cutanée pour la stimulation des réponses immunitaires. Le succès de cette nécessite un drainage efficace de vaccin vers les ganglions lymphatiques où les cellules présentant l'antigène peuvent interagir avec les lymphocytes pour la génération de réponses immunitaires recherchés. La force et le type de réponses immunitaires induites dépendent aussi de la densité ou la fréquence des interactions ainsi que le micro-environnement, en particulier la teneur en cytokines. Comme seule une infime partie de la périphérie vaccins injectés atteint les ganglions lymphatiques, la vaccination de souris et de l'homme ont été réalisées par injection directe de vaccin dans les ganglions lymphatiques inguinaux, à savoir l'injection intralymphatique. Chez l'homme, la procédure est guidée par échographie. Chez la souris, une petite (5-10 mm) incision est pratiquée dans la région inguinale des animaux anesthésiés, le ganglion lymphatique est localisé et immobilisé avec une pince, et un volume de 10-20 ul du vaccin est injecté sous contrôle visuel.L'incision est fermée avec un seul point à l'aide de sutures chirurgicales. Les souris ont été vaccinées avec de l'ADN plasmidique, l'ARN, un peptide, une protéine, des particules, et les bactéries ainsi que des adjuvants, et une forte amélioration de la réponse immunitaire contre tous les types de vaccins ont été observées. La méthode intralymphatique de la vaccination est particulièrement approprié dans les situations où la vaccination classique produit une immunité insuffisante ou lorsque la quantité de vaccin disponible est limitée.
Introduction
Les vaccins sont typiquement injectés par voie intramusculaire ou sous-cutanée pour la stimulation des réponses immunitaires. La réussite de ce procédé nécessite un drainage efficace de vaccin vers les ganglions lymphatiques où les cellules présentant l'antigène peuvent interagir avec les lymphocytes pour la production de T-et de réponses des cellules B. En outre, la force et le type de réponses immunitaires induites dépendent aussi de la densité ou de la fréquence de ces interactions ainsi que le micro-environnement lui-même, en particulier la teneur en cytokines. Comme seule une petite fraction d'un vaccin injecté dans un tissu périphérique atteint un ganglion lymphatique, la vaccination de souris et l'homme par injection directe du vaccin dans les ganglions lymphatiques, le site ont été les réponses immunitaires sont produits, ont été réalisées. Chez l'homme, la procédure est guidée par ultrasons, un procédé également utilisé pour l'administration d'agents d'imagerie pour la visualisation et de diagnostic dans le système lymphatique. Chez la souris, la procédure est invasive. Ici, une petite (5-10 mm) incision est fabriqué dans la région inguinale des animaux anesthésiés 1, le ganglion lymphatique est localisé et immobilisé avec une pince, et un volume de 10-20 ul du vaccin est injecté sous contrôle visuel, 10 pi est utilisé pour les premières injections et chez de jeunes souris avec de petits ganglions lymphatiques, tandis que 20 pl peuvent être injectés dans les ganglions lymphatiques de souris âgée ou déjà amorcés, qui ont de plus grands ganglions lymphatiques. L'incision peut être fermé avec un seul point à l'aide de sutures chirurgicales. Par cette méthode, les souris ont vaccinés avec l'ADN plasmidique de 2,3, l'ARN messager 4, 1,3,5,6 peptide, protéine 7-10, les particules 11, 12 des bactéries, ainsi que des adjuvants 7,13, et une forte amélioration de l'abri réponses contre tous les types de vaccins ont été observés. La méthode intralymphatique de la vaccination est particulièrement approprié dans les situations où la vaccination classique produit une immunité insuffisante ou lorsque la quantité de vaccin disponible est limité ou very coûteux. Chez l'homme, le procédé intralymphatique de vaccination a été appliquée à des patients allergiques à 14,15 ou 16 à 21 patients atteints d'un cancer. Bien que la notion de courant est que la méthode est intralymphatique plus invasif que d'autres méthodes injectables tels que des injections intramusculaires et sous-cutanées, la perception de la douleur n'est pas plus élevée qu'après une ponction veineuse 15. Il est prévu que la vaccination intralymphatique deviendra une alternative ou un complément à d'autres méthodes de vaccins prophylactiques et thérapeutiques en particulier. Cet article décrit en détail la façon dont la procédure de vaccination intralymphatique est réalisée chez la souris. Toutes les procédures décrites, ont été approuvés par l'Agence vétérinaire cantonal de Zurich et réalisés selon des lignes directrices et des directives sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques fédéraux suisses.
Protocol
Representative Results
Discussion
Intralymphatique immunisation et l'immunothérapie se sont révélés être appropriés pour la stimulation des deux réponses d'anticorps et de réponses des cellules T. Comme démontré dans cette vidéo-article, la procédure intralymphatique de la vaccination est une méthode rapide et facile pour stimuler une forte réponse immunitaire chez les souris. Un chirurgien qualifié peut effectuer la procédure pendant 3-4 min. La session peut également être partagé entre deux chirurgiens où l'on est gén?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs sont reconnaissants pour l'aide au développement expérimental de la méthode de la vaccination chez les souris de intralymphatique Iris Erdmann, Barbara von Beust, Maria et Julia Martínez-Gómez. Merci aussi à Maggy Arras et Nikola Cesarovic pour nous laisser utiliser leur salle d'opération pour cette production vidéo.
Materials
| Ketamine (Ketasol-100) | Graeub AG, Switzerland | Anesthetics | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer, Germany | Anesthetics | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Switzerland | To keep eyes from drying out during anesthesia. | |
| BD Micro-Fine 0.5 ml | BD Medical, France | 29 G Insulin syringes with permanently attached needles | |
| 6-0 Dermalon Monofilament nylon | Covidien, MA, USA | For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue) | |
| Curved forceps, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision and holding of lymph node | |
| Straight surgical scissors, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision | |
| Needle holder, 5.5 inch | Polymed, Switzerland | To close incision with suture | |
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