인간의 전정 신경초종의 차 문화
Summary
전정 신경초종 (VSS는) NF2 종양 억제 유전자의 돌연변이와 관련된 슈반 세포 (SC) 기원의 비 악성 종양이다. 우리는 분자 및 세포 실험 조작 및 분석이 가능하며 인간의 질병의 이질적인 성격을 되풀이되었습니다 세포 배양 VS 인간의 기본에 대한 재현, 효율적인 프로토콜을보고합니다.
Abstract
전정 신경초종 (VSS는) 모든 두개 내 종양의 10 %를 손상 슈반 세포 전정 신경의 (SC) 종양을 나타냅니다. VSS는 모두 NF2 종양 억제의 비활성화 결함과 관련된 산발적 또는 가족 중 하나 (형 신경 섬유종증 (neurofibromatosis type 2), NF2) 형태의 발생 유전자. VS들에 대한 치료는 그러나 이러한 절차의 합병증이 덜 침습적 인 치료로 조사를 주도하고있다, 일반적으로 수술 적 절제 또는 방사선 수술입니다. 역사적으로, 신선한 조직 표본에 대한 액세스 및 신경초종 세포는 불멸화되지 않는다는 사실의 부족이 크게 신경초종의 종양 형성의 연구에 대한 일차 배양의 사용을 방해했다. 차 문화의 공급이 제한을 극복하기 위해, 불후의 HEI193 VS 셀 라인은 HPV E6와 E7 발암 유전자와 형질 도입에 의해 생성 된. 이 종양 전달은 인간의 모델로 사용을 제한하는 세포에 중요한 분자 및 형질 변경을 도입chwannoma 종양. 따라서 우리는 세포 VS 인간의 기본 문화에 대한 단순화, 재생 가능한 프로토콜을 보여줍니다. 이 간단 익힌 기술은 더 정확하게 VS 질환의 복잡성을 다시 요약 분자 및 세포 조사를 허용한다.
Introduction
전정 신경초종 (VSS는) 모든 두개 내 종양 1-3의 10 %를 손상 슈반 세포 전정 신경의 (SC) 종양을 나타냅니다. VSS는 모두 NF2 종양 억제의 비활성화 결함과 관련된 산발적 또는 가족 중 하나 (형 신경 섬유종증 (neurofibromatosis type 2), NF2) 형태의 발생 유전자. VS들에 대한 치료는 그러나 이러한 절차의 사망률은 청각 장애, 안면 신경 병증, 척수액 누출, 불균형, 그리고 종양의 재성장 1을 포함, 일반적으로 수술 적 절제 또는 방사선 수술입니다. 또한 모든 환자는 허용 수술 또는 방사선 후보입니다. 대체 요법의 이러한 중요한 합병증뿐만 아니라 부족은 새로운 치료 3,4 개발의 희망 VSS의 고유의 분자 생물학에 조사를 주도하고있다.
세포 배양은 잠재적 인 치료 컴의 분자 및 세포 행동과 심사의 신속 손쉬운, 심도있는 분석을 할 수 있습니다파운드. 역사적으로, 신선한 조직 표본에 대한 액세스 및 신경초종 세포는 불멸화되지 않는다는 사실의 부족이 크게 신경초종의 종양 형성의 연구에 대한 일차 배양의 사용을 방해했다. 차 문화의 공급이 제한을 극복하기 위해, 불후의 HEI193 VS 셀 라인은 HPV E6와 E7 유전자 (oncogene) 5와 전달에 의해 생성 된. 이 종양 전달은 인간의 신경초종 종양 모델로 사용을 제한하는 세포에 중요한 분자 및 표현형의 변화를 소개했다. 기능 NF2 유전자가 부족한 유전자 변형 마우스 라인에서 파생 된 SC 문화는 체외에서 NF2 의존 SC의 종양을 조사하기 위해 다른 대안을 나타냅니다. 이러한 문화는 그러나 인간의 특정 행동에 대한 인간 VS들 또는 계정의 이질적인 성격을 요점을 되풀이하지 못한다. 대부분의 이전 VS 배양 기술은 상대적으로 긴 처리 시간과 복잡한 선택적 배양 기술 6-8이 필요합니다.면역 염색에 의해 결정 여기서 우리는 95 %의 종양 세포의 순도 3 시간에서 완전 처리와 세포 배양 VS 차에 대한 간단한 재현 프로토콜을 제시한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
체외 신경초종 문화의 역사
체외 신경초종의 문화에서 설정하는 노력이 열려 수술 적 절제 1894 년 12 발생 초기 청신경 후 몇 년을 시작했다. 최초의 기록 문화가 실패 "매달려 드롭 방법"(12) 다진 종양의 성장을 시도 1920 년대에 Kredel로했다 . 나중에 박사 부부. 머레이와 스타우트는 응고 인간 혈장에서 성장 neurilemomas과…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
지원 : NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Materials
| Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
| Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
| 0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
| 0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
| TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
| Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
| Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
| Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
| 15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
| 50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
| 2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
| Small Scissor | FST | 14058-11 | |
| Small Forceps | FST | 11251-20 | |
| Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
| #11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
| Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
| P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
| Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
| Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
| Insulated Ice Cooler | |||
| Culture Hood | Baker | ||
| Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
| N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |
Referenzen
- Arthurs, B. J., et al. A review of treatment modalities for vestibular schwannoma. Neurosurg Rev. 34 (3), 265-277 (2011).
- Evans, G. R., Lloyd, S. K., Ramsden, R. T. Neurofibromatosis type 2. Adv Otorhinolaryngol. 70, 91-98 (2001).
- Fong, B., et al. The molecular biology and novel treatments of vestibular schwannomas. J Neurosurg. 115 (5), 906-914 (2011).
- Jacob, A., et al. Preclinical validation of AR42, a novel histone deacetylase inhibitor, as treatment for vestibular schwannomas. Laryngoscope. 122 (1), 174-189 (2012).
- Evans, D. G. Neurofibromatosis 2 [Bilateral acoustic neurofibromatosis, central neurofibromatosis. NF2, neurofibromatosis type II]. Genet Med. 11 (9), 599-610 (2009).
- Anniko, M., Noren, G. The Human Acoustic Neurinoma in Organ-Culture .1. Methodological Aspects. Acta Oto-Laryngologica. 91 (1-2), 47-53 (1981).
- Manent, J., et al. Magnetic cell sorting for enriching Schwann cells from adult mouse peripheral nerves. J Neurosci Methods. 123 (2), 167-173 (2003).
- Nair, S., et al. Primary cultures of human vestibular schwannoma: selective growth of schwannoma cells. Otol Neurotol. 28 (2), 258-263 (2007).
- Baur, A. M., et al. Laminin promotes differentiation, adhesion and proliferation of cell cultures derived from human acoustic nerve schwannoma. Acta Otolaryngol. 115 (4), 517-521 (1995).
- Cravioto, H., et al. Experimental neurinoma in tissue culture. Acta Neuropathol. 21 (2), 154-164 (1972).
- Kaasinen, S., et al. Culturing of acoustic neuroma–methodological aspects. Acta Otolaryngol Suppl. 520 Pt 1, 25-26 (1995).
- Kredel, F. E. Tissue Culture of Intracranial Tumors with a Note on the Meningiomas. Am J Pathol. 4 (4), 337-340 (1928).
- Murray, M. R., Stout, A. P., Bradley, C. F. Schwann cell versus fibroblast as the origin of the specific nerve sheath tumor: Observations upon normal nerve sheaths and neurilemomas in vitro. Am J Pathol. 16 (1), 41-60 (1940).
- Cravioto, H., Lockwood, R. The behavior of acoustic neuroma in tissue culture. Acta Neuropathol. 12 (2), 141-157 (1969).
- Lee, J. D., et al. Genetic and epigenetic alterations of the NF2 gene in sporadic vestibular schwannomas. PLoS One. 7 (1), 30418 (2012).
- Wippold, F. J., 2nd, , et al. Neuropathology for the neuroradiologist: Antoni A and Antoni B tissue patterns. AJNR Am J Neuroradiol. 28 (9), 1633-1638 (2007).
- Mennel, H. D. Short-term tissue culture observations of experimental primary and transplanted nervous system tumors. J Neuropathol Exp Neurol. 39 (6), 639-660 (1980).
- Rosenbaum, C., et al. Isolation and characterization of Schwann cells from neurofibromatosis type 2 patients. Neurobiol Dis. 5 (1), 55-64 (1998).
