Modelo de Rato Induzida fotoquimicamente posterior neuropatia óptica isquémica
Summary
O objetivo deste protocolo é para induzir fotoquimicamente lesão isquêmica ao nervo óptico posterior em ratos. Este modelo é fundamental para estudos de fisiopatologia da neuropatia óptica isquêmica posterior e abordagens terapêuticas para essa e outras neuropatias ópticas, bem como de outras doenças isquêmicas do sistema nervoso central.
Abstract
Neuropatia óptica isquêmica posterior (PION) é uma doença devastador vista na prática clínica. No entanto, sua patogênese e história natural permaneceram mal compreendida. Recentemente, foi desenvolvido um modelo animal fiável, reprodutível e de PION testado o efeito do tratamento de alguns factores neurotróficos 1 neste modelo. O objetivo deste vídeo é demonstrar o nosso modelo induzida fotoquimicamente de neuropatia óptica isquêmica posterior, e avaliar seus efeitos com marcação retrógrada de células ganglionares da retina. Após a exposição cirúrgica do nervo óptico posterior, um corante fotossensibilizador, eritrosina B, é injectado por via intravenosa e um feixe de raios laser é focado sobre a superfície do nervo óptico. Interacção fotoquímica de eritrosina B e o laser durante a irradiação danos do endotélio vascular, o que levou a oclusão microvascular mediada por trombose plaquetas e compressão edematosa. A lesão isquêmica resultante produz uma gradual mas pronounced morte das células ganglionares da retina, devido a uma perda axonal de entrada – uma unidade remota, induzida por lesão e resultado clinicamente relevante. Assim, este modelo proporciona uma nova plataforma para estudar o curso de patofisiológico PION, e pode ser ainda mais optimizada para o ensaio de abordagens terapêuticas para neuropatias ópticas, assim como outras doenças isquémicas do SNC.
Introduction
Em pacientes com mais de 50 anos de idade, neuropatia óptica isquêmica (ION) é o tipo mais comum de neuropatia óptica aguda 2. A condição pode apresentar-se como um dos dois subtipos de acordo com a fonte de abastecimento específico afetado arterial e apresentação clínica: anterior (NOIA) ou posterior (PION) 3. Embora a patogênese e no curso da AION têm sido estudados extensivamente 4-7, PION manteve-se mal compreendido, devido à sua baixa prevalência, apresentação variável, critérios diagnósticos mal definidos e falta de um modelo animal. Além disso, não há tratamentos têm sido comprovada para prevenir ou reverter a perda de visão por AION ou PION eficaz. Por conseguinte, um modelo animal fiável e reprodutível de PION é de grande valor para o estudo do processo da doença in vivo e testar novos regimes terapêuticos para a neuroprotecção e regeneração axonal.
Fotoquimicamente induzida lesão isquêmica ao microvasculature resultando em vasogedema ENIC trombose e isquemia de tecido cria efectivamente regionais 8-12. Após a injeção para a circulação vascular, o corante fotossensível eritrosina B produz o oxigênio molecular singlete reativa depois da ativação por irradiação com laser de navios-alvo. O oxigénio singuleto peroxidizes diretamente o endotélio vascular, estimulação de plaquetas de adesão / agregação e levando à formação de trombo oclusivo. Dano isquêmico é se espalhar para áreas vizinhas e ainda mais exacerbada pela compressão microvascular devido a edema vasogênico. O objetivo geral deste protocolo é para induzir fotoquimicamente isquemia no nervo óptico retrobulbar para espelhar os danos causados por PION.
Para nosso conhecimento, este é o primeiro modelo de lesão isquêmica no nervo óptico posterior 1. Como este modelo produz isquemia, evitando trauma físico, os processos fisiológicos de neuropatia óptica isquêmica posterior são melhores imitou e estudou. Além disso, este modelo oferece uma nova plataforma para a seleção de candidatos terapêuticos para neuropatias ópticas e outras doenças isquêmicas do CNS. Aqui, um protocolo detalhado para cateterismo de veia femoral, a exposição do nervo óptico, a injeção intravenosa de Eritrosina B e irradiação com laser em um modelo de rato PION são descritos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Here we describe in detail a method for inducing PION in a rat model. The most critical part of the protocol is the exposure and irradiation of the optic nerve – to expose the nerve as long as possible while avoiding damage caused by the sharp fine tip forceps or from stretching. In rats, the ophthalmic artery enters the optic nerve ≤1 mm from the optic nerve head. Therefore, irradiation of the optic nerve 3-4 mm away from the optic nerve head should only result in ischemia of the capillaries feeding the nerv…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Somos gratos a Eleut Hernandez para pecuária, Gabe Gaidosh para perícia microscopia, e Tran Khue e Zhenyang Zhao para edição de vídeo. Este estudo foi financiado pelo National Eye Institute concede R01-EY022129 a JLG e subvenções P30 EY022589 para UCSD e EY014801 a UM; a American Heart Association, a Fundação James e Esther King, o fundo do programa de intercâmbio de estudantes de doutorado da Universidade Fudan Graduate School (No. 2.010.033), e um donativo incondicional da Investigação para Prevenir Cegueira, Inc.
Materials
| 532-nm Nd:YAG laser | Laser glow | LRS-532-KM-200-3 | |
| Beam chopper | custom-made | custom-made | |
| Mechanical shutter and corresponding shutter drive timer | AAM Vincent Associates | SD-10 | |
| 25-cm focal length spherical lens | CVI/Mellles-Griot | 01 LPX 293 | plano-convexBK7 glass lens with HEBBARTM antireflection coating |
| Erythrosin B | MP Biomedicals | 190449 | |
| Fluorogold | Fluorochrome,LLC | ||
| Gelfoam | Cardinal Health | CAH1203421 | |
| Polyethylene tubing (PE10) | BD Intramedic | 427400 | |
| No. 10 Blade | Miltex | 4-110 | |
| Fine Forceps | F.S.T. | 91150-20 | DUMONT #5 RUSTLESS NON-MAGNETIC |
| Forceps with Teeth | F.S.T. | 11153-10 | Germany stainless |
| Forceps | F.S.T. | 18025-10 | Germany stainless |
| Vannas spring scissors | F.S.T. | 2-220 | JJECK Stainless |
| Polyglactin suture | Ethicon | J488G | 7-0 suture |
| hemostat | F.S.T. | 12075-12 | Germany stainless |
Referenzen
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