Demostración de la rata isquémica de la piel herida Modelo
Summary
La rata, debido a su tamaño, la disponibilidad, y el comportamiento más bien dócil, se ha utilizado como un modelo de investigación durante muchos años. El objetivo de este protocolo es el de utilizar la rata como modelo de curación de la piel de la herida isquémica proporcionar información valiosa sobre la fisiopatología de las heridas crónicas.
Abstract
La propensión de las heridas crónicas en humanos aumenta con la edad, condiciones de la enfermedad como la diabetes y la función cardiovascular deteriorada, y la presión, debido a la inmovilidad. Los modelos animales han sido desarrollados que intento de imitar estas condiciones con el propósito de fomentar la comprensión de la complejidad de las heridas crónicas. El modelo descrito en este documento es un modelo de colgajo de piel de rata isquémico que permite una reducción prolongada del flujo de sangre que resulta en heridas que se convierten en isquémica y se asemejan a un fenotipo crónica de la herida (vascularización reducida, aumento de la inflamación y de cierre de heridas retardada). Se compone de una aleta dorsal bipediculado con 2 heridas isquémicas colocados centralmente y 2 heridas no isquémicas lateral a la solapa como controles. Una novela Además de este modelo de colgajo de piel isquémica es la colocación de una lámina de silicona debajo de la solapa que funciona como una barrera y una férula para evitar la revascularización y reducir la contracción como las heridas se curan. A pesar de ladebate de la utilización de las ratas para estudios de curación de la herida debido a sus diferencias anatómicas y fisiológicas muy diferentes en comparación con los seres humanos (es decir, la presencia de un músculo panículo carnoso, corta vida, aumento del número de folículos pilosos, y su capacidad de curar heridas infectadas) las modificaciones empleadas en este modelo convierten en una alternativa valiosa a los modelos de colgajo de piel isquémicos desarrollados anteriormente.
Introduction
El desarrollo de medicamentos eficaces y otras terapias de curación de heridas requieren apropiado en modelos in vivo, a pesar de los problemas conocidos en traducir los resultados en modelos animales para terapias humanas 1. Lo que sigue es una descripción de un protocolo detallado para el uso de un modelo de rata de la cicatrización de heridas isquémicas para investigar los mecanismos que promuevan la comprensión de la curación de heridas patológico. Las especies de ratas, a menudo empleado debido a su amplia disponibilidad, tamaño y naturaleza dócil se utiliza para estudios de curación de heridas, ya que es lo suficientemente grande como para proporcionar un área de la piel adecuado para heridas por incisión y escisión, de imágenes y de recogida de tejido 2. Sin embargo debe tenerse muy en cuenta que la piel de una rata y un ser humano son diferentes anatómicamente, con las ratas que se refiere a los animales como de piel suelta. Esta característica distintiva permite la contracción de la herida, en lugar de la epitelización de contribuir de manera significativa al cierre de piel de rata wounds 2. Además, la presencia de un músculo panículo carnoso subcutánea en ratas, contribuye a la curación por tanto la contracción de colágeno y la formación de 3,4. Estas distinciones anatómicas muy importantes fueron considerados en el desarrollo del modelo de herida en la piel isquémica rata y modificaciones específicas se llevaron a cabo para disminuir la contracción de la herida y reducir la influencia del panículo carnoso muscular 5.
En las úlceras del pie diabético, úlceras venosas de las piernas y las úlceras por presión, la curación se retrasa y estas heridas se considera crónica. Las heridas se caracterizan por la inflamación excesiva, lo que impide la herida progrese a las siguientes fases de la reparación de heridas 6. Uno de los principales factores en el desarrollo de una herida crónica es la isquemia localizada de tejido (reducción del flujo sanguíneo) 5 contribuir a la incapacidad para eliminar la inflamación. En el momento en que se está desarrollando este modelo y validada (en 2003-4), No había modelos animales estandarizados que podrían proporcionar suficiente tejido para probar la inducción de la angiogénesis en el lecho de la herida, una etapa clave durante la cicatrización normal de las heridas y la motivación para el desarrollo de este modelo 5. Dicho esto, el modelo presentado aquí es una modificación del modelo de herida isquémica originalmente descrito por Schwartz et al. 7 y, posteriormente, se utiliza en forma modificada por Chen et al. 8
En el modelo de herida isquémica modificado, se han hecho cambios para eludir las características anatómicas antes mencionadas de la rata que conducen a la curación por la contracción en lugar de epitelización: (1) Dos heridas por escisión de espesor completo se crean dentro de una aleta y la piel dorsal bipediculado muscular panículo carnoso se elimina de lecho de la herida mediante la disección justo encima de la fascia muscular. (2) El colgajo en sí tiene dimensiones más estrechas, lo que garantiza que el suministro de sangre es al azar y las heridas localizadas en el punto medio de tque solapa son isquémicos. (3) Una lámina de silicona se inserta debajo de la solapa, evitando readherence y reperfusión de la solapa de tejido subyacente. Contracción de la herida es limitada (no eliminado) mediante el anclaje de sutura o la solapa a la hoja de silicona 5.
El modelo ha sido utilizado recientemente en estudios que van desde efectos de oxígeno hiperbárico en la herida isquémica curación 9,10 para la cicatrización de heridas isquémicas en jóvenes frente a ratas de edad 11 y ha demostrado ser un modelo fiable de prolongada isquemia tisular. Las dimensiones de la aleta bipediculado también se han adaptado a diferentes cepas de ratas Sprague Dawley, incluyendo (11 cm de largo por 2 cm de ancho) y ratas F344 (10,5 cm de largo por 3.0-3.5 cm de ancho) y otras especies, incluyendo porcina 12 y los ratones 13,14. Este video utiliza el F344 cepa de rata endogámica en la manifestación del modelo de herida en la piel isquémica.
La aprobación para todos los procedimientos con animales se presentan a continuación era obtenered de la Universidad de Comité de Cuidado de Animales del Sur de la Florida (IACUC) y cumplir con todos los requisitos de la Ley de Protección de los Animales y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.
Protocol
Representative Results
Discussion
La cicatrización de heridas en ratas ha sido a menudo objeto de debate debido a su capacidad de curar las heridas infectadas y alto índice de variabilidad interanimal 5. Uno de los objetivos originales de la modelo durante su desarrollo fue la de disminuir esta variación. Las modificaciones de la anchura de la solapa, reduciendo el número de heridas con colocación específica (centrado en la solapa con la ubicación cráneo-caudal consistente) y la introducción de una hoja de silicona ha logrado e…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors would like to acknowledge funding support from the University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD).
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Sil-Tec medical grade sheeting | Technical Products Inc. | 500-3 | nonreinforced, 0.01 inches in thickness |
| Mini Iris scissors, 8cm, curved, SS | World Precision Instruments | #503671 | |
| Ethilon Nylon Sutures | Ethicon | 1964G | black, size 4.0, PC-3 16mm needles (3/8 circle) |
| Laser Doppler Imager | Moor Instruments | moorLDI2-IR | Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8 |
| ImageJ | NIH | free download | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| Mastisol | Henry Schein | Cat # 7289210 | Fisher Scientific NC9774929 |
| Tegaderm | Medical Specialties | 3M1624W | Fisher Scientific NC9922128 |
Referenzen
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