Гетеротопическая Почечная Аутотрансплантация в свиной модели: Протокол Шаг за шагом

Summary

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

Abstract

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.

Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Introduction

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients with end-stage renal disease, due to associated lower rates of morbidity and mortality when compared to dialysis ^1-3. Despite major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, graft shortage still poses a severe challenge worldwide. The number of patients waiting for a kidney transplant by far exceeds the number of organs available ^4-6. To increase the number of kidneys available for transplantation and to reduce patient waiting times, further sources of kidney grafts are needed.

Commonly, standard criteria donor (SCD) and extended criteria donor (ECD) kidney grafts from donation after brain death (DBD) as well as kidneys recovered from live donors (LDKT) are utilized. Since the 1990s, an increasing number of kidney grafts have been recovered in a donation after circulatory death (DCD) scenario, to further expand the donor pool ^7,8. However, DCD and ECD kidney grafts demonstrate acceptable but decreased outcomes after transplantation, depending on different factors, such as donor age, warm and cold ischemia times, and the preservation technique used ^9-11. Thus, additional research is required to improve the outcome of patients receiving marginal kidney grafts and to further increase the donor pool.

The porcine model of renal transplantation is well established and provides a clinical important scenario to investigate innovative approaches for the improvement of marginal kidney graft outcomes. In contrast to rodent and canine kidneys, which are unilobular, porcine and human kidneys are multilobular and are anatomically similar, particularly in regard to the arterial, venous, and urinary collecting systems ^12,13. In addition, porcine and human kidneys demonstrate similarities in the pathophysiology of ischemia reperfusion injury (IRI), biochemistry, and immunological parameters ¹⁴. Thus, porcine renal transplantation is well-suited to investigate new organ preservation methods for marginal kidney grafts ^15-17, model human IRI ¹⁸, study immunological pathways and allograft tolerance ¹⁹, provide surgical training ^20-22, test new pharmacological therapies ²³, implement new medical devices, and study new immunological mechanisms in xenotransplantation ^24-26.

The renal porcine and human transplantation settings are not completely analogous. This article focuses on important technical details that will facilitate successful establishment of a renal autotransplantation model. Species-adapted pre- and postoperative housing, administration of anesthesia with close monitoring, and matched surgical techniques are described in the protocol and demonstrated in the video. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess the function of the transplanted kidney. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow more in-depth assessment. For studies aimed at investigating alternative graft preservation methods and mechanisms of IRI, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the complications and confounding bias associated with rejection and use of immunosuppressive medications.

Protocol

Все животные получали гуманного ухода и все исследования мы проводили в соответствии с политикой и руководящими принципами Канадского совета по уходу за животными. Все процедуры проводились под Животное использовать протоколы, которые были утверждены в университетской сети здоровья Institutional Animal Care комитета по. Примечание: схематический обзор протокола исследования представлена ​​на рисунке 1. Рисунок 1. Протокол исследования. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. 1. Животные Используйте мужчин Йоркшир свиней (30 кг) в данном протоколе. 2. Почки Прививка поисковая Предоперационное Процедура Дом мужчины Yorkshirе свиней в научно-исследовательский центр, по крайней мере одной недели, чтобы акклиматизироваться их. Используйте внутримышечной инъекции третьего поколения цефалоспоринов, такие как цефтиофура, в течение 3 дней, чтобы уменьшить потенциальный риск инфекций Streptococcus суис и сальмонеллы. Fast свиней в течение минимум 6 ч до индукции анестезии, чтобы предотвратить аспирацию. Инициировать обезболивание свиньи путем внутримышечной инъекции кетамина (20 мг / кг), атропина (0.04 мг / кг), и мидазолама (0,3 мг / кг). Впоследствии, транспортировки животного из жилищного объекта в операционную (OR). Поместите кота в лежачем положении на столе или на. Разрешить свинья дышать 2 л кислорода с 5% изофлуран спонтанно. Expose голосовые связки с ларингоскопа и брызги их с 2% раствор для наружного применения лидокаина для предотвращения интубации индуцированных ларингоспазм. После интубации с 6,5 мм пробирку, блокировать манжету 3-5 мл воздуха. Примечание: Capnometry подтверждает правильность Positioп от интубационной трубки. Уменьшение ИФ газ до 2,5%. Установите вентилятор до 14-16 вдохов / мин и дыхательного объема до 10-15 мл / кг массы тела. Монитор свинью тесно. Частота сердечных сокращений и насыщение кислородом регистрируются импульса оксиметрии. Подтверждение надлежащего обезболивания снижением частоты сердечных сокращений (ниже 150 ударов / мин) и артериального давления (ниже систолического значений 100 мм рт.ст.), а также отсутствие свиных движений (без использования миорелаксантов). В стерильных условиях, ввести 9,5 Фр одного просвета постоянным катетером во внутреннюю яремную вену с использованием Сельдингера технику 27. Вкратце, использовать иглу, чтобы проколоть вену. После введения гид-провод, заменить иглу с кожурой на выезде проводника, с последующей заменой провода на провод сосудистой катетера. Закрепить катетер к коже с помощью 3-0 шелка или нерассасывающегося мононити шов. Администрирование 500 мг метронидазола, 1 г цефазолина и 20 мг пантопразола. Объявлениедел 200 мл лактат раствор Рингера с 5% раствором декстрозы (D5W) и 1 мл фентанила цитрата в час внутривенно всей операции. Применить ветеринарную глазной мази на глазах, чтобы предотвратить сухость под наркозом. Хирургическая процедура После стерильной дезинфекции и освещения операционного поля, выполнить срединный разрез 25 см в длину. Вставьте втягивающим. Накройте большие и малые кишечники полотенцем и поместить их в левую сторону для оптимального доступа к правой почке. Освободить мочеточник и правой почки себя от любой клейкой ткани с использованием прижигания. не Рассеките правой почечной вены и артерии с помощью прижигания до их происхождения из нижней полой вены и аорты, соответственно, являются бесплатными. Чтобы избежать артериальную спазм сосудов, введение 30-65 мг папаверина должны быть рассмотрены. После полного почечной вскрытия, галстук (шелк, 3-0) и сократить мочеточник дистальнее. ДГОеа миску с ледяной и стерильный мешок орган. Во-первых, зажим почечной артерии близко к аорте и во-вторых, зажим почечной вены близко к полой вены с использованием зажимов сосудов. Далее, резекцию трансплантата почки и сразу вводить иглу почечной артерии с помощью канюли почечной артерии. Используйте 500 мл раствора ледяной гистидин-триптофан-КГ (НТК), чтобы избавиться от крови. Храните почку на льду до трансплантации. В месте, закройте оставшиеся почечной артерии лигатурой (шелк, 2-0) и почечную вену с управлением шва (проленовой, 6-0). После проверки расчлененный область для кровотечения, закрыть брюшной стенки с управлением шва (Monofil, 1) и кожи с 3-0 шелка или нерассасывающегося мононити шов .. Послеоперационный Процедура Закрепить венозный катетер подкожно швом (шелк, 3-0) и туннель это, чтобы поддержать свиньи, чтобы предотвратить нежелательное манипуляции. После размещения свинью склонной, Suture (шелк, 3-0) катетер твердо на кожу. Отучить кота от вентилятора и пусть он восстановиться в своем жилом районе после экстубации. Администрирование лактат Рингера внутривенно в течение объемного расширения и управлять 0,3 мг бупренорфина для обезболивания. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточную для поддержания грудины лежачее положение. 3. Почки Прививка Трансплантация Предоперационное Процедура Обезболить свинью, используя внутривенную инъекцию пропофола (1-2 мг / кг массы тела) с последующим непрерывным вливанием пропофола со скоростью 50-100 мг / ч. Re-интубировать свинью, как описано в шаге 2.1.3 и 2.1.4 и установить изофлуран газа до 3-4%. Администрирование 1 г цефазолина и 20 мг пантопразола IV Во время операции, использовать тот же обезболивающий протокол, как описано в 2.1.4. После стерильной дезинфекцию, сделать разрез 4 см рядом с трахеи. Рассеките тиСГУП подвергать сонную артерию. Пойдите-Холт щипцов и шелковый галстук (2-0) вокруг артерии. Используйте технику Сельдингера ввести пластиковую катетер для непрерывного измерения артериального давления на протяжении всего хирургического вмешательства. В качестве альтернативы, неинвазивные методы измерения артериального давления могут быть использованы. Хирургическая процедура После стерильной дезинфекции, открыть брюшную полость путем разрезания петель кожи и фасции швами, вновь хирургического втягивающим подвергать брюшной полости, и переместить кишечника к левой стороне, чтобы позволить лучший доступ к инфраренального сосудов. Пересадка конца в стороне сохранились трансплантата почки на инфраренального полой вены и аорты. Поэтому, рассекают полую вену и аорту через 5-8 см выше подвздошной бифуркации с использованием пикапов и прижигание. Если это возможно, не беспокоить лимфатические сосуды; если это невозможно, закройте их с 5-0 PROLENE швов. После завершения рассечение, проверить FOг кровотечение и удалить остатки ткани из сосудов. Убедитесь, что полная фиксация полой вены и аорты с помощью зажима Сатинский осуществимо. Далее, резекцию контралатеральной (слева) почку. Чтобы сделать это, поместите кишечника вправо; рассекают мочеточник, сам почку, почечную вену и почечной артерии от клейкого ткани. Свяжите мочеточника и кровеносные сосуды и резекцию почки. Проверьте кровотечение. Повторно кишечника слева, чтобы выставить ИНФРАРЕНАЛЬНОГО аорты и полой вены. Вводят гепарин (100 МЕ / кг массы тела) и подождите не менее 2 мин. Венозный анастомоза: Используйте зажим Сатинский полностью зажать полую вену и сделать щелевой разрез, соответствующий размер открытия почечной вены, используя 11 лезвие. Pott ножницы могут быть использованы для дальнейшего расширения щели. После обертывания почку в ткань, содержащую стерильный лед, снимите его со льда и поместите его в операционное поле. Используйте два двойных вооружен 6-0PROLENE швов выполнять черепной и хвостовой угловой шов. Приблизительная почку, связать верхний угол и выполнять беговую шва с помощью 6-0 PROLENE, начиная с задней стенки. После доведя 2/3, использовать другой конец галстука, чтобы завершить шов на передней стороне. После завязывания черепных швов, связать стежки на хвостовом углу. Подставьте бульдог зажим на почечную вену и открыть зажим Сатински. Проверьте анастомоза при кровотечении. Артериальное анастомоза: Используйте Сатински зажать снова полностью зажать аорту. Используйте 11 лезвие, чтобы сделать щелевой разрез, соответствующий открытие почечной артерии. Используйте 4,0 мм круглого штампа обеспечить чистую открытие. Использование одного 6-0 проленовой шов выполнять артериальную анастомоза, начиная стороне получателя. Убедитесь, что артериального эндотелия входит в каждой нити, чтобы предотвратить расслоение. Между тем, начать внутривенное капельное вливание 10 мл norepinephrине (16 мг / 250 мл) разводили в 500 мл лактата Рингера и титруют держать систолическое давление выше 100 мм рт. Вводят верапамил внутриартериально до завершения артериальной анастомоза и администрировать папаверин местно на внешней стороне сосуда, чтобы предотвратить вазоспазм. Подставьте бульдог зажим на почечную артерию и открыть зажим Satinksy. Проверьте анастомозов при кровотечении. Разверните почку от ткани и удалить лед. Откройте венозный бульдог зажим сначала, сопровождаемый зажима артериальной бульдог. После реперфузии, производство мочи следует начинать немедленно. Используйте ткань, чтобы обеспечить выгодное положение для пересаженного трансплантата и поддерживать однородную реперфузии. Мочеточника анастомоза: Используйте POTT ножницы, чтобы открыть мочеточник от трансплантата и получателя над продольной длины 0,5 см. Используйте два 6,0 полиэстер, поли (п-диоксанон) Швы для Юр стороны в сторонуteral анастомоза. Выполните угловую Стич на каждой стороне, а затем запустить заднюю стенку в непрерывном режиме первой, а затем передней стенки. После проверки кровотечения, удаления ткань и обернуть некоторые из тонкой кишки вокруг почки, чтобы держать это в положении. Закройте брюшной стенки с двумя Monofil 1 швов. Закройте кожу 3-0 шелка или нерассасывающегося мононити шва. Поддерживать систолическое давление выше 100 мм рт.ст. непрерывно тщательно титрования норэпинефрина настой, пока свинья не был помещен в положении лежа. Послеоперационный Процедура После брюшной закрытия, как указано выше, держать свинью нагреться использованием грелку и тепловой циркуляции одеяло. Удалить артериальной линии, закрыть проколу отверстие в артерии с 6-0 проленовой Стич и закрыть место разреза. Включите свинью на положении лежа, остановить норэпинефрина капельно и отучить кота от вентилятора. Альнизкая свинья восстановить в своей площади жилья и внимательно следить за ним, чтобы обеспечить его бесперебойную восстановление после процедуры. Взять образцы крови газов каждой ч через имплантированный яремной катетер. Обеспечить лактат Рингера для замены объема и администрировать 0,3 мг бупренорфина для обезболивания. После экстубации, следить за свинью тесно, пока он не в состоянии пить самостоятельно. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточную для поддержания грудины лежачее положение. Не возвращать животное, которое претерпел операцию по компании других животных до полного восстановления. 4. Послеоперационный Follow Up Администрирование 0,3 мг бупренорфина в каждые 8 ​​ч в течение по крайней мере 2 дней после операции или дольше, если это необходимо. Регулярно вводить одну профилактическую дозу антибиотика во время операции. В случае появления признаков инфекции, не вводить цефазолин 1 г внутривенно дважды в день и метронидазол IV один раз в день до тех пор,Клиническое улучшение наступает. Администрирование лактат Рингера, пока свинья не пьет достаточное количество воды. 1000 МЕ гепарина может быть использован для фиксации катетера, чтобы предотвратить свертывание. Сбор образцов венозной крови в через яремную катетер и образцами мочи для оценки клинического состояния свиньи и функцию почек. Для эвтаназии, индуцировать анестезию свиньи с пропофолом IV (5-10 мл) и поддерживать его с ИФ 5%. Интубировать свинью, как описано выше. После relaparatomy и сбора образцов ткани почек, индуцируют остановку сердца путем внутривенной инъекции 40 mval KCl.

Representative Results

В дальнейшем, результаты экспериментов почечных аутотрансплантации (п = 4) демонстрируются. После первоначального поиска трансплантата, свиньи восстановлены в их жилом районе. Между тем, трансплантаты почек хранили на льду в течение среднего времени 7 ч 35 мин (± 18 мин). После reinduction анестезии и повторного лапаротомии, контралатеральной почки иссекают и холодные сохраненных трансплантаты трансплантируют гетеротопически как описано. После отлучения от ИВЛ, свиньи были извлечены из хирургии и наблюдались в течение 10 дней (рисунок 1). Ежедневно (1-4 день после операции; стручок) или каждый второй день были собраны (6-10 POD) образцы крови для выполнения газ анализы крови; оценить функции почек, креатинин сыворотки и азота мочевины крови оценивали значения (АМК). Для сравнения, результаты одного allotransplanted пересадке почки представлены. Для иммуносупрессии, это свинья получала циклоспорин 100 мг внутрь и Коrtisone 250 мг ivbid хирургической техники, используемой был таким же, как в протоколе аутотрансплантате; нет теплое время ишемии была применена. Все свиньи были в хорошем клиническом состоянии в течение последующего периода. Креатинина и азота мочевины значения сыворотки показал самый высокий рост в первый день после операции (CREA 2,8 ± 0,7 мг / дл, АМК 25,3 ± 7 мг / дл) и убывала до стручок 10 (Crea 1,7 ± 0,4 мг / дл, АМК 10,7 ± 4 мг / дл) близка к первоначальным исходным значениям. Allotransplanted трансплантата почки продемонстрировали более высокие значения креатинина и BUN после хорошей начальной функции трансплантата, по сравнению с аутотрансплантатов, скорее всего из-за отказа (рис 2 и 3). Кислотно-основное гемостаза (Рисунок 4), а уровень электролита (рисунок 5) были стабильными без вмешательства. Гистологическое исследование показало сохранившийся тубулоинтерстиция в autotransplanted почек (Figurе 6), и диффузного интерстициального воспаления, tubulitis и гломерулит в allotransplanted почки (рисунок 7). Рисунок 2. Значения креатинина сыворотки. Значения креатинина сыворотки (среднее и стандартное отклонение) для базового уровня и 10 после операции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. Рисунок 3. Сыворотка АМК значения. Значения Сыворотка АМК (среднее значение и стандартное отклонение) для базового уровня и 10 дней после операции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. <p class="Jove_content" fo: держать-together.within-страницу = "1"> Рисунок 4. Кислотно-основное гемостаза. Кислотно-основное гемостаза (среднее и стандартное отклонение) для базового уровня и 10 дней после операции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. Фигура уровни 5. электролита. Уровень электролитов (среднее и стандартное отклонение) для базового уровня и 10 дней после операции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. Рисунок 6. Гистология (H &# 38;.. Е), 100х Нормальная тубулоинтерстиция в autotransplanted почки 10 дней после операции Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре. Рисунок 7. Гистология (H & E), 100х. Обширный интерстициальный воспаление, tubulitis и гломерулит, согласуется с отказом, в allotransplanted почки 10 дней после операции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

Discussion

Модель свиного трансплантации почки предоставляет уникальную возможность для дальнейшего область трансплантации человека из-за сходства в хирургических аспектах, физиологии, биохимии и иммунологии ^14.

В зависимости от цели экспериментального исследования, модель почечной аутотрансплантации имеет ряд преимуществ по сравнению с моделью Аллотрансплантация. Хотя несколько групп сообщают о хороших почечной функции трансплантата после аллотрансплантации ^28, иммуносупрессии у свиней является сложной задачей, особенно в трансплантации почки. Предоперационное образец крови анализируется, чтобы обеспечить совместимость для свиней лейкоцитов антигена (SLA) осуществимы, но дорого и непрактично ^14. В послеоперационном периоде, предложенные иммунодепрессанты, такие как циклоспорин и циклоспорина (ингибиторы кальциневрина, CNI) вводят перорально или внутривенно ^28. Пероральное непрактично, так как свиньи обычно отказываются проглотить оральный медикуции. Кроме того, кишечные обструкции может устранить достаточное поглощение иммуносупрессивных препаратов и поддержания терапевтических уровней препарата. Непрерывной инфузии IV CNI в активных животных технически требовательными. Iv болюсное введение приводит к высоким значениям пика, которые вызывают токсичность. Таким образом, для исследования новых методов консервации, модель почечной аутотрансплантации имеет ряд преимуществ. В представительных результатов allotransplantated пересадке почки показано выше, с задержкой и увеличенной пике креатинина и мочевины показывают отказ, который был продемонстрирован на гистологических.

Свиной модель аутотрансплантации ранее использовалось для исследования новых методов консервации ^14,18,29. Тем не менее, сообщили послеоперационная сывороточного креатинина и азота мочевины значения autotransplanted свиней в сценарии сердца избиение может значительно варьироваться в зависимости от экспериментальной системы ^22,30 </sup>. Сердца биться протокол донор приведем приводит к низкому послеоперационном сывороточного креатинина пике 2,8 мг / дл (± 0,7) и АМК пике 25,3 мг / дл (± 7,4). Эти результаты сопоставимы с низкими значениями пиковых представленных Hanto и коллегами ²⁸ и Snoeijs и коллегами ^31.

Чтобы обеспечить успешный исход после трансплантации почки в свиной модели аутотрансплантации, мы определили несколько ключевых технических факторов, которые минимизируют скорость некоторых осложнений. Применение раствора гистидин-триптофан-КГ (HTK) снижает риск спазма сосудов из-за его более низким содержанием калия по сравнению с университетом раствора Висконсин (UW). Для дальнейшего уменьшения риска вазоспазма в точке реперфузии, верапамил может быть введен в почечную артерию, и папаверин могут быть введены местно при извлечении и после реперфузии. Кроме того, непрерывное капельное норадреналина титруют поддерживатьсистолическое кровяное давление выше 100 мм рт.ст. обеспечивает однородную реперфузии. Это полезно для поддержания этого кровяное давление, по крайней мере, пока свинья не позиционируется склонны. Кроме того, позиционирование пересаженного трансплантата важно предотвратить перекручивание вновь анастомозировали кровеносных сосудов. Поэтому было бы полезно резекцию контралатеральной левую почку до пошива анастомозов трансплантата, чтобы избежать огромный механических манипуляций. После окончания мочеточника анастомоза, упаковка тонкий кишечник вокруг пересаженного трансплантата обеспечивает его положение после закрытия брюшной стенки. Такие осложнения, как препятствия кишечника вследствие перегиба кишечника наблюдаются редко, но может привести к серьезным осложнениям, в том числе кишечной непроходимости, перфорации кишечника, и смерти. В целом, точные хирургическая техника, внимательный анестезии и тщательный контроль во время наблюдения обеспечить хороший клинический результат и функции трансплантата.

Артериальные и венозные анастомозы можно PERFOrmed с использованием различных методов. Ортотопическая размещение трансплантата позволяет конца в конец анастомозы почечной артерии и вены. В случае гетеротопной трансплантации трансплантат можно расположить в противоположной почечной ямки для конца в конец анастомоза, на подвздошных сосудов, или дистальный аорты непосредственно. Гетеротопическая трансплантация анастомозов в аорте и вены прямо в конец в бок техники являются предпочтительными в этой модели, как это может уменьшить риск тромбоза и спазма сосудов ^32. Анатомические вариации с самых ранних венозных бифуркации может привести к необходимости шитье два отдельных венозных анастомозов. Если артери или вена относительно короткие, трансплантат может быть повернуты на 180 °, чтобы получить длину сосудов. Мочеточника из стороны в сторону анастомоза можно добиться хороших результатов эксперимента без усложнения стриктуры или мочевой утечки.

В общем, свиной модель трансплантации почек предлагает преимущества по сравнению с другими животных моделях. Как гвневписанной выше, определенное сходство есть между свиной и человеческий обстановке, что позволяет относительно быстро перевод новых методов в клиническую практику. Методика трансплантации технически проще по сравнению с моделями грызунов. Кроме того, путем размещения венозные катетеры, образцы периферической крови могут быть собраны и обработаны легко для дальнейшего исследования. Сбора мочи позволяет дополнительную оценку почечной травмы и функции. Для сбора проб мочи, чрескожная катетер может быть вставлен в мочевой пузырь. Чтобы избежать манипуляции свиньи, дистальный конец должен быть тоннельный подкожно в заднюю часть животного. Еще один вариант для сбора мочи является использование метаболических клетках, которые позволяют продолжительные периоды сбора оценить клиренс креатинина и концентрацию дополнительных биомаркеров в моче. Сонография, компьютерная томография, и МРТ возможны. Пожертвование после кровообращения протоколов смерти можно имитировать, применяя теплоишемия до извлечения. Кроме того, свиньи могут быть сравнительно легко обрабатывать, если кастрировали, чтобы ограничить их агрессивное поведение.

К недостаткам можно отнести высокие затраты на приобретение животных, жилье, хирургического и другого медицинского оборудования и рабочей силы. Эти факторы означают, что это не представляется возможным включить большое количество животных в каждой исследуемой группе. Кроме того, по сравнению с моделями грызунов, ограниченное число ссылок доступны в литературе для свиней нормативных биологических данных. В качестве альтернативы для оценки новых развитых методов, таких как новые методы сохранения, другие группы описали нормотермических Экс Vivo реперфузии в качестве альтернативы трансплантации почки ^33,34. Эта методика проще выполнить и менее дорогим. Тем не менее, стандартизирована трансплантация почки привитой обеспечивает модель больше похожа на клиническую практику и позволяет больше следить за периоды. Поэтому он служит для более реалистичной оценки трансплантатания.

В заключение отметим, что свиной модель гетеротопической почечной аутотрансплантации обеспечивает клиническую важную сценарий расследовать инновационные новые подходы для улучшения результатов почек привитых. В частности, этот протокол характеризует наиболее важные технические детали, которые будут способствовать успешному созданию почечной модели аутотрансплантации и позволяет быстро перевод новых открытий в клинических испытаниях.

Materials

Anesthesia Equipment
Anesthesia Machine, Optimax	Moduflex Anesthesia Equipment	SN5180
Infusion Pump 3,000	SIMS Graseby LTD.	SN300050447
Infusion Pump Line	Smith Medical ASD Inc.	21-0442-25
Intravenous permanent catheter (9.5 Fr)	Cook Medical Company	G01865
Isoflurane Vapor 19.1	Draeger Medical Canada Inc.	N/A
Mallinckrodt, Tracheal Tube, 6.5 mm	Covidien Canada	86449
Temperature Therapy Pad	Gaymar Industries Inc	TP26E
Ventilator, AV 800	DRE Medical Equipment	40800AVV
Warm Touch, Patient Warming System	Nellcor/ Covidien Canada	5015300A
Name	Company	Catalog Number	Comments
Surgical Equipment
Abdominal Retractor	Medite GmbH	07-0001-00
Aorta/vein punch 4.0 mm, round	Scanlan International Inc.	1001-602
De Bakey, Atraumatic Peripheral, Clamp	Aesculap Inc.	FB463R
De Bakey-Beck, Atraumatic Vena Cava, Clamp	Aesculap Inc.	FB519R
De Bakey, Atraumatic Mini-Bulldog, Straight	Aesculap Inc.	FB422R
De Bakey, Atraumatic Mini-Bulldog, Curved	Aesculap Inc.	FB423R
De Bakey, Atraumatic Coarctation Clamp, Angled	Aesculap Inc.	FB453R
Dissection Blade #11	Feather Safety Razor Co.	089165B
Connector (1/4") with male luer lock	Sorin Group Inc.	AB1452
Liver Admin Set (flush line)	CardioMed Supplies Inc	17175
Maxon, 1	Covidien Canada	606173
Med-Rx Suction Connecting Tube	Benlan Inc.	70-8120
Organ Bag	CardioMed Supplies Inc	2990
Potts – De Martel, Scissors	Aesculap Inc.	BC648R
Renal artery cannula, 1.6"	Sorin Group Inc.	VC-11000
Sofsilk, 2-0	Covidien Canada	S405
Sofsilk, 3-0	Covidien Canada	S404
Satinsky, Suprahepatic Cava Clamp	Aesculap Inc.	FB605R
Suction Tip	Tyco Healthcare Group LP	8888501023
Surgipro II, 6-0	Covidien Canada	VP733X
Valleylab, Cautery Pencil	Covidien Canada	E2515H
Valleylab, Force Tx	Valleylab Inc.	216151480
Valleylab, Patient Return Electrode	Covidien Canada	E7507
Name	Company	Catalog Number	Comments
Medication
Atropine Sulfate 15 mg/30 ml	Rafter 8 Products	238481
Buprenorphine 0.3 mg/ml	RB Pharmaceuticals LDT	N/A
Ceftiofur 3 mg/mL	Pfizer Canada Inc.	11103
Cefazolin 1 g	Pharmaceutical Partners of Canada Inc.	2237138
Fentanyl Citrate 0.25 mg/5 ml	Sandoz Canada Inc.	2240434
Heparin 10,000 iU/10 ml	Sandoz Canada Inc.	10750
Histidine-tryptophan-ketoglutarate (HTK) solution	Methapharm	CU001LBG
Isoflurane 99.9%, 250 ml	Pharmaceutical Partners of Canada Inc.	2231929
Ketamine Hydrochloride  5000 mg/50 ml	Bimeda-MTC Animal Health Inc.	612316
Lactated Ringer’s + 5% Dextrose 1 L	Baxter Corporation	JB1064
Lactated Ringer’s 1 L	Baxter Corporation	JB2324
Metronidazole 500 mg/100 ml	Baxter Corporation	870420
Midazolam 50 mg/10 ml	Pharmaceutical Partners of Canada Inc.	2242905
Norepinephrine 16 mg/250 mL Dextrose 5%	Baxter Corporation	N/A
Pantoprazole 40 mg	Sandoz Canada Inc.	2306727
Papaverine 65 mg/2 mL	Sandoz Canada Inc.	9881
Propofol 1000 mg/100 ml	Pharmascience Inc.	2244379
Saline 0.9%, 1 L	Baxter Corporation	60208
Solu-Medrol 500 mg	Pfizer Canada Inc.	2367963
Verapamil	Sandoz Canada Inc.	2166739
Xylocaine Endotracheal 10 mg/50 ml	AstraZeneca	2003767