We present a protocol to measure [14C]-iodoantipyrine (IAP) uptake and assess the activation of neural substrates that are involved in central post-stroke pain (CPSP) in a rodent model.
Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to nociceptive stimuli. Although some studies have shown that neuropathic pain may involve the dorsolateral prefrontal cortex, rostral anterior cingulate cortex, amygdala, hippocampus, periaqueductal gray, rostral ventromedial medulla, and medial thalamus, the neural substrates and their connections that mediate CPSP remain unclear. [14C]-Iodoantipyrine (IAP) uptake can be measured to evaluate spontaneously active pain. It can be used to assess the activation of neural substrates that may be involved in CPSP in an animal model. The [14C]-IAP method in rats is less expensive to perform compared with other brain mapping techniques. The present [14C]-IAP protocol is used to measure the activation of neural substrates that are involved in CPSP that is induced by lesions of the ventral basal nucleus (VB) of the thalamus in a rodent model.
İnme kanama nöropatik ağrı muzdarip hastaların% 8'den fazla meydana geldiği görülmüştür olarak merkezi felç sonrası ağrı (CSKA) atıfta bulundu. 1-3 CSKA somatosensör disfonksiyonu, böylece aşırı duyarlılık ve allodini uyaran neden olabilir. 4 Ancak , CSKA somatosensoriyel disfonksiyonu patofizyolojik mekanizmaları belirsizdir. Örneğin, somatik duyu kaybının hemorajik beyin bölgesinde nöronal deafferentasyonu kaynaklanır. Hiperaljezi merkezi nosiseptif sinir hücrelerinin ya da merkezi disinhibisyon, 5, 6, ancak CSKA semptomlar yer sinirsel substratlar halen bilinmemektedir hiper uyarılabilirliğine neden olabilir. Bazı çalışmalar dorsolateral prefrontal korteks (dPFC), rostral anterior singulat korteks (ACC), amigdala, hipokampus, periakuaduktal gri (PAG), rostral ventromedyal medulla ve birbirleriyle olan bağlantılarını nosiseptif işleme aracılık ileri sürmüşlerdir. Ek 7ly, medial prefrontal korteks (MPFC) -amygdala devreleri CSKA patofizyolojik mekanizmaları üzerinde 8 Veri çeşitlidir. ağrıya bağlı algısında rol oynadığı gösterilmiştir ve CSKA nöral substratların aktivasyonu daha fazla inceleme ihtiyacı vardı.
[14 C] -Iodoantipyrine (IAP) alımı beyin aktivitesi ve CBF arasında bir ilişki varsayarak, dolaylı olarak bölgesel serebral kan akımı (rCBF) gözlemlemek için kullanılır. Her ne kadar [14 C] -IAP gibi fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme (fMRI) ile olduğu gibi, gerçek zamanlı olarak beyin aktivitesini değerlendirmek olamaz, bu çeşitli avantajları vardır. Örneğin, [14C] -IAP kendiliğinden ölçüm patolojik durumları sırasında beyin olay meydana için uygundur. 9 Ayrıca, [14C] -IAP alım anestezi olmadan ölçülür. Aynı zamanda fMRI ve pozitron emisyon tomografisi (PET) gibi diğer görüntüleme yöntemleri, daha az maliyeti. [14C] -IAP yöntemi Ölçme ve uygun olduğu ileri sürülmüştürtalamusun ventral bazal nükleus (VB) lezyonlarının indüklenir g spontan ağrı (örneğin, CSKA). 9
Mevcut protokol hayvan modelinde talamus VB lezyonları ile indüklenir CSKA nöral yüzeylerde katılımını değerlendirmek için [14C] -IAP yöntemi gerçekleştirmek açıklamaktadır. teknik, davranışsal ve nöronal düzeyde CSKA belirtileri altında yatan patofizyolojik mekanizmaları belirleme yol sunar.
Davranışsal testlerde, CSKA grubu başlangıçta von Frey testi termal ağrı testi ve mekanik kuvvet pençe çekme eşiği azalmaları ve 1 hafta sergilendi -. 5. bulguları önceki bir çalışmada uyumluydu 14
[14 C] -IAP yöntem farklı beyin dilimleri kantitatif analiz için beyin görüntülerinin piksel yoğunluğuna dayanır. beyin görüntüleri verileri değerlendirmek için, piksel sinyal yoğunluğu tanımlanmıştır. 46,979 CPM – Bu çalışmada, çevre …
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışmada Dr. Bai-Chuang Shyu (MGK 99-2320-B-001-016-My3, MGK 100-2311-B-001-003-My3 ve MGK 102-2320- Ulusal Bilim Konseyi hibe ile desteklenmiştir B-001-026-My3). Bu çalışma Academia Sinica fon aldı Biyomedikal Bilimler, Enstitüsünde yürütülmüştür.
Anesthetic: | |||
Isoflurane | Halocarbon Products Corporation | NDC 12164-002-25 | 4% |
Surgery | |||
homeothermic blanket system | Harvard Apparatus | Model 50–7079 | body temperature were maintained at 36.5-37.5°C. |
10µl micro syringe | Hamilton | 80008, Model 1701SN | injected with collagenase |
polyethylene-50 tubing | Becton, Dickinson and Company | 427411 | catheterized into external jugular vein |
1 c.c syringe | Terumo Medical Products | SS-01T | injected with 14C-IAP and saline. |
saline (Sodium Chloride 0.9gm) | Taiwan Biotech Co., LTD. | 100-130-0201 | To flush the tube |
Drugs: | |||
type 4 collagenase | Sigma | C5138-500MG | 0.125 U |
Gentamicin | Sigma | G1264-250MG | 6 mg/kg |
Heparin | Sigma | H9399 | 20 U/ml; 0.1 ml/day |
14C-iodoantipyrine (IAP) | PerkinElmer | NEC712 | 125 mCi/kg in 300 ml of 0.9% saline |
Potassium chloride | Merck | 1.04936.1000 | 3 M |
Behavior system: | |||
von Frey esthesiometer | Fabrication Enterprises, Inc. | Baseline Tactile Monofilaments 12-1666 | mechanical hyperalgesia was assessed by measuring the withdrawal response to a mechanical stimulus |
plantar test apparatus | IITC Life Science | IITC 390G Plantar Test | Thermal hyperalgesia was assessed by measuring the hind paw withdrawal latency in response to radiant heat. |
Brain slice: | |||
Optimal Cutting Temperature compound | Sakura Fintek Inc | 4583 | embedded the brain |
dry ice | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55°C) | ||
methylbutane | Sigma | M32631-1L | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55°C) |
Cryostat | Leica Biosystems Nussloch GmbH, Germany | Leica CM1850 | Coronal brain slice were sectioned on this machine. |
Data analyze | |||
exposure cassettes with a phosphor screen | Amersham Biosciences | 20 cm x 25 cm | The slices were dried on glass slides and placed alongside five standard filter papers with graded radioactivity. All of the slides were exposed to the cassettes at −20°C. |
γ-counter | Beckman Coulter | Beckman LS 6500 Liquid Scintillation Counter | To measure the radioactivity count of the filter papers. |
Typhoon 9410 Variable Mode Imager | GMI, Inc. | WS-S9410 | To read phosphor screen which was exposed by brain slice |
Statistical Parametric Mapping (SPM) | Wellcome Centre for Neuroimaging | version 8 | all of the brains were averaged to create the final brain template. To determine significant differences between the images in these two groups, the images were derived by subtracting the sham group from the CPSP group. |
ImageJ | http://imagej.nih.gov/ij | version 1.46 | Adjacent sections were aligned both manually and using Stack- Reg, an automated pixel-based registration algorithm in ImageJ software. All of the original three-dimensionally reconstructed brains were smoothed and normalized to the reference rat brain model. |
Matlab | MathWorks | version 2009b | used Pearson correlation coefficients to examine the relationships between the CPSP and sham groups. An inter-regional correlation matrix was calculated across animals from each group. |
Pajek | http://Pajek.imfm.si/ | version 3.06 | Graphical theoretical analysis was performed on networks defined by the above correlation matrices using Pajek software. |