نموذج الفئران من المجموعة الثانية<em> العقدية</em> المهبلية الاستعمار

Summary

والغرض من هذا البروتوكول هو تقليد مجموعة بشرية الثانية العقدية (GBS) الاستعمار المهبل في نموذج الفئران. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لتحقيق الاستجابة المناعية والعوامل البكتيرية المساهمة في GBS استمرار المهبلي، وكذلك لاختبار الاستراتيجيات العلاجية.

Abstract

العقدية القاطعة للدر (المجموعة الثانية العقدية، GBS)، هو إيجابية الجرام، المستعمر بدون أعراض في الجهاز الهضمي البشري والقناة المهبلية من 10 – 30٪ من البالغين. في الأفراد المناعة للخطر، بما في ذلك حديثي الولادة، والنساء الحوامل، وكبار السن، قد GBS التبديل إلى الممرض الغازية تسبب تعفن الدم والتهاب المفاصل والالتهاب الرئوي، والتهاب السحايا. لأن GBS هي العوامل المسببة للأمراض البكتيرية الرائدة في مجال حديثي الولادة، وتتألف الوقاية الحالية من أواخر فحص الحمل للGBS الاستعمار المهبل واللاحقة العلاج بالمضادات الحيوية الفترة المحيطة بالولادة من الأمهات GBS إيجابية. عبء المهبل GBS الثقيل هو أحد عوامل الخطر بالنسبة للأمراض الأطفال حديثي الولادة والاستعمار. للأسف، لا يعرف إلا القليل عن البلد المضيف والعوامل البكتيرية التي تشجع أو تسمح GBS الاستعمار المهبل. يصف هذا البروتوكول تقنية لإنشاء المستمر GBS الاستعمار المهبل باستخدام واحدة-β استراديول ما قبل المعالجة وأخذ العينات اليومية لتحديد مبناها البكتيريةد. ذلك مزيدا من التفاصيل أساليب لإدارة العلاجات أو الكواشف من فوائد إضافية وجمع المهبل السائل غسل وأنسجة الجهاز التناسلي. وهذا نموذج الفأر يعزز فهم التفاعل GBS المضيف ضمن بيئة المهبل، والتي سوف تؤدي إلى الأهداف العلاجية المحتملة للسيطرة الاستعمار المهبل الأمهات أثناء الحمل ومنع انتقال العدوى إلى الأطفال حديثي الولادة المعرضين للخطر. كما سيكون من مصلحة لزيادة فهمنا للتفاعلات البكتيريا في استضافة العامة في القناة المهبلية الإناث.

Introduction

العقدية القاطعة للدر، المجموعة الثانية العقدية (GBS)، هو، البكتيريا إيجابية الجرام مغلفة التي غالبا ما تكون معزولة من الأمعاء والجهاز البولي التناسلي من البالغين الأصحاء. في 1970s، ظهرت GBS وكيلا للوفيات حديثي الولادة المعدية، مع أكثر من 7000 حالة من حالات مرض حديثي الولادة سنويا ^1. المبكر بداية GBS مرض (التخلص من الذخائر المتفجرة) ويحدث في الساعات أو الأيام الأولى من الحياة، ويطرح نفسه هو الالتهاب الرئوي أو ضيق في التنفس، وغالبا ما يتطور إلى تسمم الدم، في حين أن المرض تأخر ظهور (اللد) تستتبعه بعد عدة أشهر، ويقدم مع تجرثم الدم، والتي في كثير من الأحيان التقدم إلى التهاب السحايا ^2. اعتبارا من عام 2002، ومراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها توصي الفحص الشامل لGBS الاستعمار المهبل في أواخر الحمل والوقاية باستخدام المضادات الحيوية الولاد (IAP) لأمهات GBS الإيجابية ^1. وعلى الرغم من الحد من المرض المبكر بداية إلى ما يقرب من 1000 حالة في الولايات المتحدة بسبب سنويا لIAP،يبقى GBS السبب الرئيسي للتسمم في حديثي الولادة في وقت مبكر الحدوث، وتأخر ظهور قوع يبقى بمنأى ^1. سواء في الرحم، أثناء العمل، أو حتى في الحالات المتأخرة من البداية، تعرض الرضع لGBS يتطلب البقاء على قيد الحياة، مستعرضة من خلال عدد من البيئات المضيفة والحواجز، والتهرب المناعي، وفي حالة التهاب السحايا، عبور بالدم درجة عالية من التنظيم حاجز الدماغ ^2. المنبع من هذه التفاعلات خبيثة داخل الوليد هو الاستعمار الأولي من القناة المهبلية الأمهات. الأم GBS معدلات الاستعمار المهبلية تتراوح 8-18٪ في البلدان المتقدمة والنامية، وبمعدل متوسط يقدر ب 12.7٪ ^3،4. GBS استعمار القناة المهبلية أثناء الحمل قد يكون ثابتا، متقطعة، أو عابرة في الطبيعة بين النساء الفردية ^5. ومن المثير للاهتمام، ويرتبط والأمهات العمر> 36 عاما مع الاستعمار المستمرة ^6. عوامل الخطر البيولوجية والاجتماعية والاقتصادية العديدة لGBS الاستعمار المهبلتم تحديدها. وتشمل العوامل البيولوجية الهضمي الاستعمار GBS وغياب الملبنة في الأمعاء. ومع ذلك، كما تم المرتبطة العرق، السمنة، والنظافة، والنشاط الجنسي مع GBS النقل المهبل ^7.

على الرغم من اشتهر يسبب العدوى حديثي الولادة، يسبب GBS أيضا مجموعة متنوعة من الالتهابات الأمهات على حد سواء الفترة المحيطة بالولادة وبعد الولادة. يتم زيادة GBS النقل في النساء مع تقديم المهبل ^8، وفي بعض الحالات، قد يكون حتى الكيان المرض ^9. بالإضافة إلى ذلك، GBS صعود الجهاز التناسلي أثناء الحمل قد يؤدي إلى عدوى داخل السلى أو شريوأمنيونيتيس ^10. وعلاوة على ذلك، في ما يصل إلى 3.5٪ من حالات الحمل، GBS نشر إلى المثانة البولية أن يسبب عدوى المسالك البولية أو الجرثومية عديمة الأعراض ^(11). ويرتبط الجرثومية GBS خلال فترة الحمل مع زيادة خطر الاصابة بالحمى أثناء الولادة، شريوأمنيونيتيس، الولادة المبكرة، وprematurالبريد تمزق الأغشية ^12. معا، ويرتبط وجود GBS داخل القناة المهبلية لالتهابات أنسجة المضيف متعددة، والقدرة على القضاء على GBS من هذا المتخصصة أمر حتمي بالنسبة للصحة الأمهات والأطفال حديثي الولادة.

حتى وقت قريب، والغالبية العظمى من عمل دراسة التفاعلات GBS مع الجهاز عنقي مهبلي اقتصر على نماذج الخلايا في المختبر ^13-15. وقد كشفت هذه التجارب في المختبر العوامل البكتيرية التي تعتبر مهمة للالتزام، بما في ذلك البروتينات السطحية مثل هذه الشعرة وسيرين الغنية يكرر ^17،18، وكذلك النظم التنظيمية اثنين من عناصر ^15،19 واستجابة النسخي العالمية للظهارة المهبل ل GBS ^19. ومع ذلك، لتوضيح كامل التفاعلات المضيف ميكروب داخل القناة المهبلية، وهذا نموذج حيوان قوي أمر ضروري. أظهر العمل في وقت مبكر أن GBS يمكن استردادها من القناة المهبلية من الفئران الملقحة ^20،21 والجرذان <سوب> 22 في كل الظروف الحوامل وغير الحوامل. في عام 2005، كان على غرار المدى القصير GBS الاستعمار المهبل في الفئران لدراسة فعالية انزيم فج التحللي لعلاج GBS المهبلية خلال فترة 24 ساعة ^23. بعد عدة سنوات، وقد وضعت على المدى الطويل GBS الاستعمار المهبل نموذج الفأر لدراسة العوامل المضيفة والبكتيرية التي تحكم GBS المثابرة. وقد حدد هذا النموذج العديد من العوامل التي تسهم في GBS الاستعمار، بما في ذلك الزوائد سطح ^17،18 وGBS أنظمة اثنين من عناصر ^19،24. وقد ساهم هذا النموذج على تحديد آليات الاستجابة المضيف ^19،25، وكان يستخدم لاختبار العديد من الاستراتيجيات العلاجية، بما في ذلك الببتيدات المناعية ²⁶ و البروبيوتيك ^27. هذا البروتوكول يعطي التوجيهات اللازمة لتطعيم GBS في القناة المهبلية الماوس وتتبع فيما بعد الاستعمار وجمع عينات لإجراء المزيد من التحليلات.

Protocol

وقد وافق كل عمل الحيوانية مكتب مختبر رعاية الحيوان في جامعة ولاية سان دييغو وأجرى بموجب المعايير البيطرية مقبولة. إناث الفئران، سن 8-16 أسابيع استخدمت، لتطوير هذا الأسلوب. 1. إعداد وداخل الصفاق حقن β استراديول <li style=";te…

Representative Results

خلال تطوير هذا النموذج، لوحظ متعددة بشأن العوامل التي تؤثر على مدة GBS الاستعمار المهبل. لتحديد مرحلة كيف داقية في الآثار التلقيح GBS استمرار البكتيرية، ونظموا الفئران في يوم من التلقيح عن طريق السائل غسل المهبل. ويوضح الشكل 1 المراحل الأربع ?…

Discussion

لتعزيز النهوض فهم التفاعلات GBS مع كل من المضيف والميكروبات الأخرى في سياق المضيف، مطلوب نموذج حيواني. يصف هذا العمل الجوانب التقنية لإنشاء GBS الاستعمار المهبل في الفئران. هذا البروتوكول يحقق> 90٪ الاستعمار من الفئران من دون استخدام التخدير لتطعيم البكتيريا أو لجمع ع…

Materials

Sesame oil	Sigma Aldrich	S3547-250ML
β-Estradiol	Sigma Aldrich	E8875-1G	CAUTION: Wear appropriate PPE. β-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.
200 μL gel loading pipette tips	USA Scientific	1252-0610
Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs	Puritan	25-801 A 50
CHROMagar StrepB	DRG International	SB282
Todd Hewitt Broth	Hardy Diagnostics	7161C
18 G, 1.5 inch needles	BD	305199
26 G, 0.5 inch needles	BD	305111
10 mL syringes	BD	309604
1 mL syringes	BD	309659
0.45 μm PVDF syringe filters	Whatman	6900-2504
Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution 1X	Corning	21-031-CV