ひと血清における心筋バイオ マーカーを定量化する臨時の光伝送を使用してください。
Summary
この作業では、異常な光透過の原理で動作する高品質センシング アレイを作製するナノイン プリント リソグラフィ法について説明します。バイオ センサーが低コスト、堅牢で、使いやすいと心筋トロポニンを検出することができます私は臨床的に関連性の高い濃度 (99thパーセン タイル カットオフ ∼10 400 pg/mL、アッセイによって) 血清で。
Abstract
ポイント ・ オブ ・ ケア (POC) 設定の臨床的意義を持っているバイオセンシング プラットフォーム、アッセイの感度、再現性、およびひと血清の背景に検体を確実に監視する機能が重要です。
ナノイン プリント (NIL) リソグラフィは、センシン 1.5 mm × 1.5 mm ほど低コストで作製する使用されました。ナノホール各約 140 nm2の領域の忠実度の高い配列のセンサー面をしました。NIL の偉大な再現性では、チップに変化が少なく、12 の個別に製造面 1 チップ、1 測定戦略を採用することが可能。これらのナノイン プリントの局在表面プラズモン共鳴 (LSPR) チップが確実にこのケースでは、人間の血清の流体の複雑な背景中 75 ng/mL に 2.5 から様々 な濃度で bioanalyte を測定する能力を広範囲にわたってテスト。NIL 可能このバイオ センサーは一般に利用できる実験室光源に簡単にインターフェイスできるので、順番、顕微鏡の必要性を排除する大きなセンシング分野の世代の高忠実性。これらのバイオ センサーを検出できます心筋トロポニン血清中 0.55 ng/ml 検出 (LOD) の制限で、感度の高い臨床的に適切であります。彼らはまた低いチップ ・ ツー ・ チップの差異 (作製プロセスの高品質) を示します。結果が広く使われている酵素免疫測定法 (ELISA) とけた違い-基づいた試金が LSPR ベース センシングプラット フォーム (すなわち、こうして小型化、多重化、それを作るの利点を保持する技術現実的な POC アプリケーション)。
Introduction
ナノホール アレイを用いた化学センサー異常な光透過 (EOT) の最初のレポートは Ebbesenら1998年1によって出版されたので多くの捜査の対象とされています。サブ波長サイズのナノホール構造体の周期的な配列に光が入射する、特定の波長の高度な転送が発生します。これには、ブロッホ波表面ポラリトン (BW SPP) および/または局所励起表面プラズモン (LSP)2と入射光のカップルとが発生します。
悪用された場合、このような周期配列を用いた、単純な基になる物理的な原則。または金属製界面近傍の分子の吸着は、ターンではスペクトルの透過帯の場所をシフト、金属との接触媒質の誘電を変更します。スペクトル自体は、ナノ工学、形状、サイズ、および分離距離3,4,5で調整できます。仕様では、EOT に基づくセンサー分子結合イベントの調査の間に特定の割り当て6,7、8を促進するスペクトルに特徴的なバンドがあります。これ市販の表面プラズモン共鳴 (SPR) プラットフォーム上の重要な利点です。
通常 EOT を利用したセンサーには、光源が平行光がセンサー面に入射するように光学的配置が含まれます。共重合体のテンプレートと干渉やナノ粒子リソグラフィーなどの大きなナノホール サーフェスを生成する技術は、再現性に乏しく9を持っています。正確に EOT 現象を示す大きな面を加工でこれらの制限により光学顕微鏡光源と検出器を適切に配置する必要があります。技術、ナノイン プリント高品質・ リソグラフィーを簡素化するには、(NIL)10が採用されました。これはチップにセンサー面を顕微鏡の必要性を削除する大規模なセンサー表面領域11 (mm スケール) の生産が可能。代わりに、このセンサーは、簡単に標準的な光ファイバケーブルと接続する可能性があります。
このナノホール アレイの伝送のピークは、可視近赤外領域 (NIR) に含まれている、ので、生体分子の水溶液環境のバインド イベントを検出に最適です。ナノホール アレイの光動作をシミュレートしました。結果は、標準屈折 (RI) の液体の研究を通じて確認されました。この配列は、心筋トロポニンの濃度を測定する使用された私 (cTnI) ひと血清の複雑背景下で。cTnI は急性心筋梗塞の診断のための臨床のゴールド スタンダードです。
このセンサーを使用して、検出し、臨床的に適切である 0.55 ng/ml 検出 (LOD) の制限でひと血清中 cTnI を定量化することが可能です。検出は、酵素免疫測定法 (ELISA) は、このドメインで最も一般的に使用される技術よりも速いです。さらに、センサー面が簡単に再生され、そのため再利用します。したがって、この作業は複雑な生体内バイオセンシングのための現実的なポイント ・ オブ ・ ケア (POC) 技術としてナノホール アレイの約束を示しています。
Protocol
Representative Results
Discussion
入射光とナノ構造の相互作用をシミュレートすると、試料の濃度の関数としてのシフトを記録できる (透過スペクトル) の適切なピークを識別することが可能になります。センサーの構造に関してバンドのローカリゼーションは試料を意味するそのシフトを追跡ことができます右のバンドを選択することが重要に注意してくださいすることが重要です。シミュレーションにより可視化を実現で…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
AP には、教授 T Venkatesan、ディレクター、NUS ナノサイエンス ・ ナノテクノロジー ・ イニシアティブ副大統領 (シンガポールの国民大学) (R-398-000-084-646) のオフィスのサポートが認めています。CLD は、サポートのシンガポール省の保健医療研究評議その臨床医科学者資金調達スキームの下でナノ材研/CSA/035/2012, とシンガポール国立大学を認めています。資金提供者には、研究デザイン、データ収集と分析、意思決定を発行し、または原稿の準備の役割はなかった。
Materials
| Electron Beam Lithography setup | Elionix ELS 700 | ||
| o-Xylene | Sigma Aldrich | 95662 | |
| EB resist | Sumitomo | NEB-22A2 | |
| Developer reagent | Shipley Company | Microposit MF 321 | |
| Electroplating machine | Technotrans AG RD 50 | ||
| Photoresist stripper | Rohm and Haas Electronic Materials LLC | Microposit Remover 1165 | |
| Etching System | Trion Phantom | ||
| Heptadecafluoro-1,1,2,2-tetrahydrodecyl)trichlorosilane | Gelest (PA, USA) | 78560-44-8 | |
| SAM coater | Sorona Inc. | AVC 150M | |
| Photo-curable NIL resist | micro resist technology GmbH | mr-UVCur21-300nm | |
| Light Curing System | Dymax | Model 2000 Flood | |
| E-beam deposition machine | Denton Explorer | ||
| UV-visible spectrometer | Ocean optic HR2000+ (Dunedin, FL, USA) | ||
| Standard refractive index liquids | Cargill Inc (Cedar Grove, USA) | 18032 | |
| Plotting software | Origin | Origin Pro 9 | |
| 10-carboxy-1-decanethiol | Dojindo Laboratories (Japan) | C385-10 | |
| 1-octanethiol | Sigma-Aldrich, MO, USA | 471386 | |
| Sulfo-N-hydroxysuccinimide and 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide | BioRad (CA, USA) | 1762410 | |
| Anti-troponin antibody 560 | Hytest (Finland) | 4T21 | |
| Ethanolamine-HCl solution | BioRad (CA, USA) | 1762450 | |
| Surface Plasmon Resonance setup | BioRad XPR36 (Haifa, Israel) | ||
| Multiplexed SPR chip | BioRad | GLC | |
| Human cTnI standard | Phoenix Pharmaceuticals | EK -311-05 | |
| Glycine-HCl | BioRad (CA, USA) | 1762221 |
Referenzen
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