Efectos del trasplante Allogeneic Plasma rico en plaquetas (PRP) en el proceso de cicatrización de los tendones de Aquiles seccionado de las ratas: una descripción metodológica
Summary
Este protocolo describe el proceso de evaluación de la curación de tendones en ratas que han sido inyectados con plasma rico en plaquetas alogénicas (PRP) o solución salina después de quitar parte del tendón de Aquiles. Se evalúa el progreso de la curación del tendón en varios puntos del tiempo utilizando diferentes tipos de análisis.
Abstract
Este artículo describe los procedimientos experimentales utilizados para observar si PRP puede afectar positivamente curación del tendón. Hay 4 principales pasos a seguir: inducir una lesión en el tendón de Aquiles; preparar PRP e inyecte (o solución salina); quitar el tendón; y realizar evaluaciones biomecánicas, moleculares e histológicas. En cada paso, todos los procedimientos y métodos se describen en detalle, para que puedan reproducirse fácilmente.
Tendones de Aquiles han sido seccionado quirúrgicamente (extirpación de una sección larga de 5 mm). Luego, se inyectó PRP o solución salina para estudiar si el PRP tiene un efecto positivo en la curación del tendón. Tres grupos de 40 animales (un total de 120 ratas fueron utilizados en este estudio) se subdividieron en 2 subgrupos: Grupo de control grupo de inyección de PRP y una inyección de solución salina. Las ratas fueron sacrificadas a aumentar puntos de tiempo (grupo A: 5 días; Grupo B: 15 días; Grupo C: 30 días) y tendones fueron quitados. 90 tendones experimentaron la prueba biomecánica antes de realizar el análisis transcriptómico y los 30 restantes tendones fueron sometidos a análisis histológico.
Introduction
Las funciones de modulación de la inmunidad de las plaquetas, la coagulación y procesos inflamatorios son conocida1. Más recientemente, se ha demostrado que también tienen propiedades restaurativas2,3. De hecho, varios factores de crecimiento y citocinas (VEGF, TGF-B, PDGF, IGF-I y HGF) son liberados por las plaquetas durante la degranulación. Estos factores de crecimiento promueven la angiogénesis, remodelación tisular y herida curativo (hueso, piel, músculo, tendón)2. La centrifugacion de sangre autóloga produce plasma rico en plaquetas (PRP) que contiene plaquetas altas concentraciones dependiendo del método de aislamiento (entre 3 y 10 veces de la sangre las concentraciones de línea base). De hecho, diversas técnicas de preparación de PRP no pueden proporcionar un producto final. Hasta ahora, no ha habido ningún acuerdo general internacional sobre este tema. En general, el PRP podría ser una opción terapéutica atractiva para el tratamiento de crónicos musculoesqueléticos como Tendinopatía, fascitis plantar, osteoartritis y consolidación4. Fue utilizado por primera vez en cirugía bucal e implantología4 para mejorar y acelerar la curación después de colocar un implante dental del hueso. En este estudio, describimos un método reproducible que permite la adquisición de PRP para experimentación animal4.
Puesto que las lesiones de tendones se observan con frecuencia en deportistas y trabajadores físicos, mejorar el proceso de curación y reduciendo el tiempo de recuperación son de gran interés5. Nuevos métodos de tratamiento que se están desarrollando a menudo implican el uso de factores de crecimiento, y la administración de PRP es una manera simple y mínimamente invasiva para entregar una combinación de factores endógenos de crecimiento4.
Varios estudios en vitro o en animales han demostrado que la administración de plasma que contiene un alto nivel de las plaquetas, liberando mediadores biológicos, puede estimular la reparación de tendones y ligamentos por liberación de mediadores biológicos6 ,7,8,9. Además, otros estudios han demostrado que puede estimular la PRP tipo I y la síntesis de colágeno III en tendón las células9,10,11. También se ha sugerido que el PRP puede disminuir la activación de metaloproteinasas de matriz (MMPs) y por lo tanto reducir la degradación de la matriz. Las células que intervienen en el proceso de la inflamación pueden producir MMP-9, que juega un papel en la remodelación tisular (fisiológicos y patológicos) inducida por inflamación12.
Basado en esta información, la hipótesis de que una sola inyección de PRP en los tendones de Aquiles seccionados de las ratas podría mejorar el proceso de recuperación y la resistencia mecánica del tejido reparado. Esto se prueba mediante la medición de las propiedades biomecánicas de los tendones de sanación durante el proceso de recuperación y realizando los análisis histológicos y moleculares para evaluar colágeno remodelado en el tejido recién formado. El objetivo del estudio fue observar si una sola inyección de PRP allogeneic pueda influir en la curación de tendones de Aquiles seccionados.
Protocol
Representative Results
Discussion
Las plaquetas son esenciales para la primera fase inflamatoria del tendón del proceso de curación. Cuando estas plaquetas están expuestas a atar el tejido o factores que inducen coagulación, liberan factores de crecimiento que se almacenan en los gránulos α. Debido a esta interacción, macromoléculas de la matriz extracelular son sintetizado y proliferan las células mesenquimales. Las plaquetas tienen también una actividad quimiotáctica sobre las células progenitoras en la circulación de la sangre, mejorar la…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue apoyado por el Standard de Lieja y Lejeune – Lechien subvenciones de los fondos de Frédéricq de León.
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
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