Screening-Assays zur Charakterisierung neuartiger endothelialer Regulators der entzündlichen Reaktion beteiligt

María Ángeles Higueras; Lidia Jiménez-García; Sandra Herranz; Sonsoles Hortelano; Alfonso Luque

doi:10.3791/55824

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Methodenartikel

Screening-Assays zur Charakterisierung neuartiger endothelialer Regulators der entzündlichen Reaktion beteiligt

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DOI:

10.3791/55824

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15. September 2017

María Ángeles Higueras¹ , Lidia Jiménez-García¹ , Sandra Herranz¹ , Sonsoles Hortelano^*¹ , Alfonso Luque^*¹

¹Pharmacological Therapies Unit, Research Institute for Rare Diseases, Institute of Health Carlos III

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Gefäßendothels steuert dicht Leukozyten Rekrutierung. Unzureichende Leukozyte Extravasation trägt zur entzündlichen Krankheiten des Menschen. Daher ist es notwendig, bessere Therapien für entzündliche Erkrankungen zu entwerfen, auf der Suche nach neuartigen regulatorischen Elemente der endotheliale Aktivierung. Hier beschreiben wir eine umfassende Methodik um neuartige endotheliale Regulatoren zu charakterisieren, die Leukozyten während einer Entzündung des Menschenhandels ändern können.

Zusammenfassung

Die endotheliale Schicht ist unerlässlich für die Aufrechterhaltung der Homöostase im Körper durch viele verschiedene Kontrollfunktionen. Verordnung der Entzündungsreaktion durch die endotheliale Schicht unbedingt effizient bekämpfen schädliche Eingaben und Hilfe bei der Wiederherstellung der beschädigten Bereiche. Wenn die Endothelzellen, einer entzündlichen Umgebung, wie die äußere Komponente von Gram-negativen Bakterien Membran, Lipopolysaccharid (LPS), ausgesetzt sind sie zum Ausdruck bringen wasserlöslicher Pro-inflammatorischen Zytokinen, wie Ccl5, Cxcl1 und Cxcl10, und Auslösen der Aktivierung des zirkulierenden Leukozyten. Der Ausdruck der Adhäsionsmoleküle E-Selektin, VCAM-1 und ICAM-1 auf der endothelial Oberfläche ermöglicht darüber hinaus das Zusammenspiel und die Adhäsion der aktivierten Leukozyten, die endotheliale Schicht, und schließlich die Extravasation auf das entzündete Gewebe. In diesem Szenario muss die endotheliale Funktion streng reguliert werden, da übermäßige oder fehlerhafte Aktivierung bei der Rekrutierung von Leukozyten zu entzündlichen Erkrankungen führen könnte. Da viele dieser Erkrankungen eine wirksame Behandlung nicht verfügen, müssen neue Strategien mit Fokus auf die vaskuläre Ebene untersucht werden. Wir bieten umfassende Tests, die auf der Suche nach neuartigen endotheliale Regulierungsbehörden nützlich sind, die Leukozyten-Funktion zu ändern. Wir analysieren endotheliale Aktivierung durch verschiedene Techniken, einschließlich Konkretisierung Ziele beteiligt bei der Rekrutierung von Leukozyten (z. B., Zytokine, Chemokine und Adhäsionsmoleküle) mit: Echtzeit-quantitative Polymerase-Kettenreaktion () RT-qPCR), Western-Blot, flow Cytometry und Adhäsion Assays. Diese Ansätze bestimmen die endotheliale Funktion im Zusammenhang mit entzündlichen und sind sehr nützlich für Screening-Tests um neuartige endotheliale entzündliche Regulierungsbehörden zu charakterisieren, die potenziell wertvoll für die Entwicklung neuer therapeutischer Strategien durchführen.

Einleitung

Die Entzündung ist eine positive biologische Reaktion gegen infektiöse Agenzien, mit dem großen Ziel, den Erreger zu eliminieren und geschädigtes Gewebe zu reparieren. Unter bestimmten Bedingungen, z. B. chronische Infektionen oder Autoimmunerkrankungen beheben Entzündungen nicht. Stattdessen gibt es eine anomale Reaktion mit kontinuierlicher Infiltration der Leukozyten, wodurch eine verlängerte Immunantwort, die führt zu Gewebeschäden, Fibrose, Verlust der Funktion, und die allgemeine, Behinderung und in einigen Fällen zum Tod des Patienten. Diese menschliche Störungen, katalogisiert als entzündliche Erkrankungen beinhalten alle die Blutgefäße für die Kontrolle der L....